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- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
African Swine Fever Virus(ASFV)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海一研
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50T
1.一种实时荧光定量PCR检测EB病毒C/D基因基因分型试剂盒，其特征在于，由定量PCR反应液(1)、C型标准品(2)、D型标准品(3)、阳性对照品(4)、阴性对照品(5)、病毒DNA抽提裂解液(6)、操作说明书(7)、盒体(8)、盒盖(9)组成，其中定量PCR反应液(1)含有PCR缓冲液、Mgcl2、dNTPs、EB病毒C/D基因基因通用上游引物、EB病毒C/D基因基因通用下游引物、C型荧光探针、D型荧光探针、Taq DNA聚合酶，上游引物序列为:5’ATACTCCCGCCATGCGACT3’，下游引物序列为：5’CTGTCACAACCTCACTGTCAT3’C型荧光探针为：5’FAMCCTGCGGACCCCGATMGB 3’，D型荧光探针为：5’VICCCTGCGGATCCCGATMGB 3’。
| 产品名称 | 非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 英文名称 | African Swine Fever Virus(ASFV) |
| 编号 | EY00P3664 |
非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒运输及保存低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。
产品及特点:
非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒从土壤农杆菌 CP4 菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因，是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因，因此本公司根据探针法 qPCR 原理开发了专门用于检测非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 根据非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒成分，但不能检测其他非非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒成分。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。
6. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的探针法荧光定量 PCR。
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
技术原理：
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
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KKCC1 Polyclonal Antibody 钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶激酶1 抗体
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RFC5 Polyclonal Antibody 复制因子C5 抗体
RFA4 Polyclonal Antibody 复制蛋白A4,34kDa 抗体
非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒D-环丝氨酸 0.1g/支*2加入250ml TSC琼脂基础中
产芽孢肉汤 250用于产气荚膜梭菌的产芽孢培养
多粘菌素B 1.2mg/支*5用1ml无菌水溶解后添加于100ml HB0256中
多价蛋白胨-酵母膏 (PY) 培养基 250用于产气荚膜梭菌的培养(SN标准)
疱肉牛肉粒 100加入疱肉基础中，配成疱肉培养基
卵黄琼脂培养基基础 250用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养（GB标准）
乙酰琼脂Acetamide Agar用于绿脓杆菌的选择性分离培养（GB标准）
十六烷三基溴化铵琼脂Cetrimide Agar用于绿脓杆菌的选择性分离培养（GB标准）
甘露醇发酵培养基Mannitol Medium生化试验培养基，用于细菌（如金黄色葡萄球菌）甘露醇发酵试验（GB标准）
明胶培养基基础Gelatin Medium Base生化试验培养基，用于细菌明胶液化试验（GB标准）
绿脓菌素测定培养基(PDP)King Medium A 用于绿脓杆菌的绿脓菌素测定试验（GB标准）
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文献和实验恩泽康泰进军家畜外泌体研究领域——全面解锁猪/牛/羊/鸡外泌体研究
的潜在指标(Animal. 2021 Apr;15(4):100182. IF=3.6 2区)，等研究。 b.疫病/家畜疾病 急性肺损伤、猪流行性腹泻病毒感染、非洲猪瘟病毒（ASFV）、亚洲鸡瘟感染传播等，在养猪等家畜业都有一定的发病率，给患病动物造成了极大的痛苦，同时也给养殖户造成了巨大的经济亏损，严重的可造成患病动物死亡。因此，阐述外泌体介导的家畜疾病发病和感染病毒传播机制，也是一个需要进行研究的方向，以期为家畜养殖生产中相关疾病防控提供
相关专题 实验室很多同学都要做Real time PCR实验，实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见，不过也有实验室前没有做过的，查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。 荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量PCR技术的特异性比常规PCR技术大大提高。目前较常提及的有TaqMan探针、FRET杂交 探针(荧光共振能量传递探针)和分子
所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
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