白扁豆鉴定PCR试剂盒

白扁豆鉴定PCR试剂盒实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
Muscle (CKM)    48T/96T    Bos taurus; Bovine (Cattle)
肌肌酸激酶(CKM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Creatine Kinase, Muscle (CKM)    48T/96T    Canis familiaris; Canine (Dog)
组织蛋白酶L(CTSL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cathepsin L (CTSL)    48T/96T    Bos taurus; Bovine (Cattle)
组织蛋白酶L(CTSL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cathepsin L (CTSL)    48T/96T    Danio rerio (Zebrafish)
组织蛋白酶L(CTSL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cathepsin L (CTSL)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)
组织蛋白酶L(CTSL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cathepsin L (CTSL)    48T/96T    Sus scrofa; Porcine (Pig)
组织蛋白酶L(CTSL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cathepsin L (CTSL)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
半乳糖凝集素7(GAL7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 7 (GAL7)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
半乳糖凝集素7(GAL7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 7 (GAL7)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)
半乳糖凝集素7(GAL7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 7 (GAL7)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
半乳糖凝集素9(GAL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 9 (GAL9)    48T/96T    Bos taurus; Bovine (Cattle)
半乳糖凝集素9(GAL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 9 (GAL9)    48T/96T    Canis familiaris; Canine (Dog)
半乳糖凝集素9(GAL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 9 (GAL9)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
半乳糖凝集素9(GAL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 9 (GAL9)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)
半乳糖凝集素9(GAL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 9 (GAL9)    48T/96T    Sus scrofa; Porcine (Pig)
半乳糖凝集素9(GAL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Galectin 9 (GAL9)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
载脂蛋白H(APOH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Apolipoprotein H (APOH)    48T/96T    Bos taurus; Bovine (Cattle)
载脂蛋白H(APOH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Apolipoprotein H (APOH)    48T/96T    Canis familiaris; Canine (Dog)
白细胞激活黏附因子(ALCAM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM)    48T/96T    Bos taurus; Bovine (Cattle)
白细胞激活黏附因子(ALCAM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM)    48T/96T    Chicken (Gallus)核纤层蛋白B2(LMNB2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Lamin B2 (LMNB2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
尿溶蛋白3B(UPK3B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Uroplakin 3B (UPK3B)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
尿溶蛋白1B(UPK1B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Uroplakin 1B (UPK1B)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
尿溶蛋白2(UPK2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Uroplakin 2 (UPK2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
血管非炎性蛋白2(VNN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Vanin 2 (VNN2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
线粒体融合素2(MFN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Mitofusin 2 (MFN2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Midline 2蛋白(MID2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Midline 2 (MID2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
多聚蛋白2(MMRN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Multimerin 2 (MMRN2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Metaxin 2蛋白(MTX2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Metaxin 2 (MTX2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
黑素皮质激素4受体(MC4R)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Melanocortin 4 Receptor (MC4R)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
黑素皮质激素5受体(MC5R)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Melanocortin 5 Receptor (MC5R)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
神经元导向因子3(NAV3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Neuron Navigator 3 (NAV3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
神经元导向因子2(NAV2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Neuron Navigator 2 (NAV2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
溶血磷脂酶Ⅲ(LYPLA3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Lysophospholipase III (LYPLA3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Piccolo蛋白(PCLO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Piccolo (PCLO)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
肾胱素5(N5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Nephrocystin 5 (N5)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
磷酸二酯酶7A(PDE7A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phosphodiesterase 7A (PDE7A)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
白扁豆鉴定PCR试剂盒磷酸二酯酶8A(PDE8A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phosphodiesterase 8A (PDE8A)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
磷酸二酯酶8B(PDE8B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phosphodiesterase 8B (PDE8B)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
磷酸二酯酶9A(PDE9A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phosphodiesterase 9A (PDE9A)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
磷酸二酯酶10A(PDE10A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phosphodiesterase 10A (PDE10A)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
磷酸二酯酶11A(PDE11A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phosphodiesterase 11A (PDE11A)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
磷酸二酯酶12(PDE12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phosphodiesterase 12 (PDE12)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
甘油磷酸二酯磷酸二酯酶1(GDE1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Glycerophosphodiester Phosphodiesterase 1 (GDE1)    48T/96T    Homo sapiens 轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。

PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。 主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。