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- 百奥莱博
- QN1060-UEL
- 北京
- 2025年07月11日
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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-20℃
- 规格：
20ug
特别提示：包括pET-28a(+)载体在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：pET-28a(+)载体
产品货号：QN1060
产品规格：20ug
pET-28a(+)是一种常用的融合蛋白类型原核高效表达载体，含有抗卡那霉素基因。表达由宿主细 胞提供的 T7 RNA 聚合酶诱导。
宿主菌：建议克隆用 E.coli DH5α 或 TOP10 做受体菌;表达用 E.coli BL21(DE3)或 BL21(DE3)pLysS 做受体菌。
储存条件 ：-20℃
我公司销售的pET-28a(+)载体北京品牌，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
最近做了taq酶的表达和纯化，将优化的实验流程和一点心得贴上来，希望对大家有帮助，更希望得到批评和指正 TaqDNA聚合酶表达载体的构建与提取纯化 1 .背景 重组TaqDNA聚合酶基因及表达载体插入重组Taq DNA聚合酶基因的pET-28a表达质粒，该质粒是由美国Novagen公司推出的能在大肠杆菌中高效表达的一种质粒载体。该质粒在克隆位点前有1个T7启动子，在T7启动子前有1个6×His-Tag coding序列，是T7的增强子，多克隆位点上有NcoI—Xhol11
的构建与转化 以克隆质粒pGEM-3Zf(-)-TFPI为模板通过PCR扩增TFPI基因，其中引物在设计中引入了Nco工和Not工限制性内切酶位点。应用NcoI和NotI双酶切TFPI基因片段和表达载体pET-28a(+)，并用T4DNA连接酶将酶切产物进行连接，构建表达质粒pET-28a(+)-TFPI。将连接产物直接转化感受态大肠杆菌DH5c~，涂布于LBK平板，挑单克隆放大培养，并抽质粒进行双酶切检测及测序分析，筛选出重组的阳性克隆。 (四)TFPI基因N端密码子优化
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