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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
345
- 英文名:
E.coli BL21 Chemical Competent Cell
- 保质期:
半年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-80℃
- 规格:
0.1mL*10
特别提示:包括大肠杆菌BL21化学感受态细胞在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:大肠杆菌BL21化学感受态细胞
英文名称:E.coli BL21 Chemical Competent Cell
产品货号:BTN140428
产品规格:0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。本产品用作表达载体的宿主,适用于毒性蛋白的表达,适用于不是基于T7启动子的表达系统。使用pUC19质粒检测,本产品转化效率可达107。
菌株基因型为:BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-)gal。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的。
我公司销售的大肠杆菌BL21化学感受态细胞北京品牌,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验的菌株在30oC而不是在37oC生长,更有利于连接。作简单的亚克隆连接实验,亚克隆转化效率的感受态细胞就可满足克隆需要,更高转化效率的感受态细胞可用于作比较困难的克隆实验。为提高获得目的克隆的机会,应用尽可能高转化效率的感受态细胞(>108克隆/μg DNA)。 (2)大肠杆菌基因型 hsdR 有利于非甲基化DNA(如PCR扩增产物)的有效转化。 mcrA 有利于甲基化DNA(如基因组)的有效转化。 acZΔM15 用于蓝白斑筛选。 endA1 无Endonuclease I 酶活性,有利
表达载体的构建是生物技术和所需蛋白质产生的基本工具,本文总结了pET-32α(+)载体技术的构建,该技术通常用于研究实验室。该方法包括获得用于构建载体的外源DNA片段,将DNA片段亚克隆到pET-32α(+)表达载体中,在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行蛋白质表达以及在大肠杆菌中在天然条件下进行蛋白质纯化。裂解液。介绍作为分子生物学实验室中非常有用的实践,重组DNA技术(或基因克隆)是指将DNA片段从一种生物体转移到自我复制的遗传元件如表达载体。然后插入的DNA可以在外源宿主细胞中繁殖
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