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上海机纯实业有限公司
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Origami(DE3)感受态细胞
菌株类型: E.coli
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: Origami(DE3)pLysS感受态细胞基因型
抗 性: 卡那,链霉素,四环素,氯霉素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应 用: 蛋白表达, 含二硫键蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点:
Origami系列感受态细胞是K-12细胞的衍生而来,在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变,这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键,有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。研究表明使用Origami系列的 感受态细胞表达获得的活性二硫键蛋白比其他同类感受态细胞要多10倍左右。
Origami系列感受态细胞能够用于氨苄抗性质粒的蛋白表达,尤其是和pET32a载体能够完美搭配使用。pET32a载体含有thioredoxin (TRX)融合标签,能够高效提升胞质内蛋白二硫键的形成。
TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性,所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。为了减少细胞内多种分子间的二硫键的形成,含有TrxB和Gor基因突变的宿主菌被建议用于含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达。
DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体,及其他T7启动子系列载体。
含有pLSs质粒,pLySs质粒能够产生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。
亮氨酸缺陷型菌株。
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文献和实验摘要: 本文主要介绍了各种感受态细胞的区别、用途和特征. Xl1-Blue菌株 基因型: endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F'[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+).
菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。 E.coli JM110 要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110 如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化. 各种感受态细胞的区别 用途 特征
适合 用作初始克隆宿主菌的 K-12 菌株,具有高转化效率、蓝 / 白斑筛选能力(与合适质粒)和导致优质质粒 DNA 高产的 recA endA 突变。由于存在 F 附加体编码的 lacI q 阻遏蛋白, NovaBlue 的 DE3 溶原菌是一个非常有用的严紧型宿主菌。 Origami 为 K-12 衍生的宿主菌,硫氧还蛋白还原酶突变 ( trxB ) 和谷胱甘肽还原酶 ( gor ) 基因均为突变,能够大大增强胞浆内二硫键的形成。研究表明即使总体表达水平相似, Origami










