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- 沪震生物/HZbscience
- HZ-1010
- 进口/国产
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
AH109 Chemically Competent Cell
- 保质期：
-80℃（6个月）
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 保存条件：
-80℃（6个月）
AH109 Chemically Competent Cell 产品说明书
产品规格
AH109 Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3个月）
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存：-20℃（12个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12个月）
基因型
MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3, MEL1 GAL2UAS- GAL2TATA-ADE2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ
产品说明
AH109菌株来源于PJ69-2A 酵母菌株，将lacZ报告基因引入PJ69-2A诞生了AH109，此菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为：trp1，leu2，报告基因为：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1。AH109-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1~174位氨基酸区段的DNA结合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成 bait融合蛋白(bait –BD)和 prey融合蛋白 (prey-AD)，如果 bait和 prey发生相互作用，就会促使 BD和 AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子 (GAL1，GAL2，MEL1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17 bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。AH109感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取100 µl冰上融化的AH109感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA (95-100度5 min,快速冰浴，重复一次) 10 µl，PEG/LiAc 500µl并吸打几次混匀，30度水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
4. ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. AH109酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90 h培养可见直径1 mm克隆。
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文献和实验Yeast Two-Hybrid Screening to Test for Protein–Protein Interactions in the Auditory System
We describe a protocol to screen for protein-protein interactions using the Gal-4 based yeast two-hybrid system. In this protocol, we describe serial transformation of bait into an already constructed cDNA library in yeast AH109 cells
ESCO-1520 ESCO 温度探头EA701CA-4 EA701CA-4
ESCO-1526 ESCO 刷子EA109E-1 刷子EA109E-1 ESCO-1525 ESCO 夹具EA500-100 夹具EA500-100 ESCO-1524 ESCO 超音厚度计EA706X-10 EA706X-10 ESCO-1523 ESCO 扳手EA614CE-13 EA614CE-13 ESCO-1522 ESCO 扳手EA616BB-13 EA616BB-13 ESCO-1521 ESCO 翘片修正器EA
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克
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