- ¥680 - 2680
- 沪震生物/HZbscience
- HZ-2010L
- 进口/国产
- 2025年07月07日
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- 英文名：
S17-1 λpir Chemically Competent Cell
- 保质期：
-80℃（6个月）
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 保存条件：
-80℃（6个月）
- 规格：
盒
S17-1 λpir Chemically Competent Cell 产品说明书
产品规格
S17-1 λpir： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510
产品说明
S17-1 λpir菌株的染色体中整合了RP4-2质粒，该质粒可以携带染色体的部分DNA在接合菌株之间转移。 S17- 1 λpir菌株缺失核酸内切酶 (endA1)，提高了质粒DNA的产量和质量；同时为重组酶缺陷型 (recA1)，减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。Tn7赋予该菌株弱的链霉素抗性。唯地生物生产的S17-1 λpir感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×108 cfu/μg DNA。
操作方法
1. S17-1 λpir感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养（12-15 h）。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验. The pir gene is usually supplied by a lambda lysogen. Such strains include DH5alpha-lambdapir, SY327-lambdapir, SM10-lambdapir, and S17-lambdapir. The last two strains supply the tra genes for efficient conjugation. Cloning into pCVD442 Cloning in pCVD
7 的缓冲液来洗脱；洗脱液提前预热至 65℃ 也可以提高洗脱效率。 3. 提取质粒转化大肠杆菌效率低 大肠杆菌转化效率受到多种因素的影响，例如感受态细胞状态，转化方式及操作（电转或热激），质粒用量，质粒质量等等。从感受态角度优化，可以考虑感受态本身的状态，比如贮存时间、贮存方式不当会导致感受态转化效率明显降低，此外热激条件也会影响感受态转化效率，建议热激时间严格按照感受态类型或说明书操作。从质粒角度优化，可以进一步确认质粒用量，质粒浓度，质粒是否降解等。 4. 提取质粒转染细胞效率低
1、存放：超级感受态细胞必须从干冰运送包装箱取出直接放入–80℃冰箱的底部。一定不要用液氮来存感受态细胞。1) 存放条件：超级感受态细胞对微小的温度改变也极度敏感，因此必须存放在–80℃冰箱的底部。即使是将细胞从一个冰箱转移到另一个冰箱也会导致转化效率的损失。采用BD Falcon 的14ml聚丙烯圆底试管：在转化实验中使用圆底14-ml BD Falcon聚丙烯试管（货号 #352059）也是关键之一。一般的试管容易被b-巯基乙醇降解。而极为重要的热激步骤的操作也是根据这种型号的试管优化
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