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慢病毒,腺病毒,以及RNAi\基因过表达专业服务
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汉恒生物
腺病毒包装
重组腺病毒(AdV)是一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型(Ad5),其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞,然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内,借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。
腺病毒特点:
1.感染范围广:腺病毒可适用于普通细胞系的感染,也可用于悬浮细胞、原代细胞等。
2.感染效率高:腺病毒的滴度可高达1011PFU/ml,感染效率高,可感染悬浮细胞、原代细胞等。
3.载体容量大:腺病毒的载体容量较大,最高可达8kb。
产品分类
● 普通Ad5重组腺病毒-适用普通细胞系感染;
● 原代细胞专用腺病毒-适用各种原代细胞基因转导;
● 悬浮细胞专用腺病毒-专为悬浮细胞特殊设计,也兼容普通细胞和原代细胞,效率更高;
腺病毒感染实例
腺病毒感染贴壁细胞

mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒感染HCT116和HT29, 汉恒客户2017年发表于CELL,IF>30
腺病毒用于动物实验
腺病毒纯化的滴度可达到1011PFU/ml,用于动物实验。

小鼠眼部结膜下注射纯化腺病毒Ad-SIRT1和对照AdGFP:PFU=1011/ml,3 μl/single eye;48hr后观察GFP表达。
腺病毒感染原代细胞

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文献和实验目前慢病毒载体主要应用在以下几个方面: 细胞基因治疗(截止目前,已上市的 CAR-T 产品有 9 款采用了慢病毒载体递送 CAR 基因) 基因表达调控(过表达、RNA 干扰研究等) 基因编辑(CRlSPR/Cas9 gRNA 文库筛选、基因敲除、敲入、点突变、基因激活/抑制) 稳转细胞株构建 活体细胞成像追踪 转基因动物 图 1 慢病毒载体的主要应用方向 应用案例 案例 1:用慢病毒载体进行基因过表达,构建稳转细胞株,研究葡萄糖激酶在前列腺癌(PCa)中的作用[1] 细胞
光蛋白表达的启动子在目标组织中不活跃或不合适,可能导致荧光蛋白表达不足或不表达; 表达时间不足:荧光蛋白的表达可能需要一定的时间。如果感染时间不够长,荧光蛋白可能尚未充分表达,导致观察不到荧光。 使用合适的启动子以确保荧光蛋白在目标细胞中有效表达;增加感染时间,确保荧光蛋白有足够时间表达。 荧光检测的问题 检测方法不敏感:如果荧光蛋白表达量较低,可能需要敏感的设备或技术来检测。如果检测设备灵敏度不足,可能导致检测不到荧光。 组织自发荧光:一些组织本身可能具有自发荧光,干扰了荧光蛋白的检测
)、3’UTR区(3’UTR associated)、基因间(intergenic)这7种类型。这种位置关系对于推测lncRNA的功能有很大帮助。 图二 lncRNA分类(Huang X, et al.Cancer Lett. 2018 Jan 28;413:94-101.) 一般来说,lncRNA主要从以下三种层面实现对基因表达的调控: 表观遗传学调控:lncRNA招募染色质重构复合体到特定位点进而介导相关基因的表达沉默。 转录调控:包括如下几种:1)lncRNA的转录能够干扰临近基因的表达
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