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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
289
- 英文名:
MLV Reverse Transcriptase
- 保质期:
2年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
10KU|50KU
特别提示:包括MLV逆转录酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:MLV逆转录酶
英文名称:MLV Reverse Transcriptase
产品货号:MT0013
产品规格:10KU|50KU
MLV逆转录酶是我司在鼠源病毒反转录酶基础上进行改良而得的第四代反转录酶,可耐受55℃高温反应。相比于传统42℃条件下反转录反应,采用55℃反转录可更好地打开RNA二级结构,从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量,因此能更好地提高后续检测的灵敏度。此外,MLV反转录酶通过定点突变去除了RNase H活性,从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强。
产品组成:
| 组分 | MT0013-10000U | MT0013-50000U |
| MLV逆转录酶(200U/μl) | 50μl | 250μl |
| 10×RT Buffer | 500μl | 1ml×2 |
储存:-20℃可保存2年。
单位定义:以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物,在37℃条件下,10分钟内催化1nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为一个活性单位。
操作方法:
1.按以下组分配制反应体系:
| 加入物 | 加入量 |
| MLV Reverse Transcriptase | 0.5-1μl |
| 10×RT Buffer | 2μl |
| dNTP Mixture(10 mM each) | 1μl |
| Total RNA or Poly(A) RNA | 0.1-2μg |
| 20×Oligo dT(25)&Random Primer * | 1μl |
| RNase Inhibitor(40 U/μl) | 0.5μl |
| RNase-Free H2O | Up to 20μl |
*注:Oligo dT(25) 使用浓度为 20~50μM, 如使用Random9随机引物可使用125μM,基因特异性引物可使用5μM。
2.在PCR 仪上按下列条件进行反转录反应:
30℃——————15 min
55℃——————30~60 min
85℃——————10 min
4℃
3.反转录所得的cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于-20℃。
我公司销售的MLV逆转录酶报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNase A,B,C对RNA的降解,并不能防止皮肤上的RNase,因此尽管使用了这些抑制剂,也要小心不要从手指上引入RNase。 使用无RNaseH活性(RNaseH-)的逆转录酶 逆转录酶催化RNA转化成cDNA。不管是M-MLV还是AMV,在本身的聚合酶活性之外,都具有内源RNaseH活性。RNaseH活性同聚
产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。 二、实验试剂 Taq酶,M-MLV逆转录酶,dNTPs, DEPC处理水,双蒸水,大肠杆菌总RNA 三、实验 仪器 电泳仪, PCR仪,高速离心机,移液器,电泳仪,电泳槽,紫外分析仪 四、操作步骤 1.cDNA的合成: 逆转录体系的组成: 2.PCR扩增特异性片段 (1)25ul PCR体系
请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分?
Total RNA X 总体积 10 总体积 10 DRR033A的RT配方居然连镁离子都没有,是不是含在5×M-MLV Buffer中了?这2种体系(其实就是2种逆转录酶)的镁离子浓度差别有多大?能否造成扩增反应的不同?dNTP的量也差了一倍,能相互通用吗?恳请高手们解密!不甚感激!
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