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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
29
- 英文名:
Y1HGold 感受态细胞
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ul*50
规格:100ul*50
分类:酵母感受态细胞
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
Y1HGold 感受态细胞100ul*50培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
Y1HGold 感受态细胞100ul*50注意事项:
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化,转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物,保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
Y1HGold 感受态细胞100ul*50操作说明:
待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖,冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟,待其融化,加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19; --
B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬,DNA 浓度 不超过 100ng/μl,体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖--。
4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推 荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基(室温),用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后,转移到 50ml 离心管(BD Falcon50ml 锥形离心管等),向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃,225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌,重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上(因菌量较大,若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个)。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞;RAW 264.7 [RAW264.7替卡西林(标准品)Ticarcillin disodium salt质量规格:含量测定,二钠盐
FGFR2 Others Human 人 FGFR2 / CD332 人细胞裂解液 (阳性对照) RGD肽Arg-Gly-Asp 质量规格:>97%,integrin抑制剂
小鼠子细胞;U14肝素锂Heparin lithium质量规格:>150IU/MG,BR
IL18R1 Others Canine 狗 IL18R1 人细胞裂解液 (阳性对照) 促胰液素;胰泌素Secretin Acetate质量规格:>98%,BR
HEC-1A, 人子宫内膜癌细胞系麝香草酚Thymol质量规格:AR
人细胞;Hela S3 [HeLaS3]乙二醇苯(standard for GC,≥99.5%(GC))Ethylene glycol monophenyl ether质量规格:standard for GC,≥99.5%(GC)
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人脐带血单个核细胞阿瑞匹坦-标记d4Aprepitant - Labeled d4质量规格:美国进口
头孢唑啉,唑啉头孢菌素 Cefazolin 质量规格:>99%,BR 调料乙酸激酶法定量检测试剂盒20
头孢唑啉(标准品) Cefazolin 质量规格:>99%,标准品 调料总乳酸比色法定量检测试剂盒20
文多灵(标准品) Vindoline 质量规格:HPLC≥98%,标准品 同酸待测样品处理试剂盒20
茶碱(标准品) Theophylline 质量规格:HPLC≥98%,标准品 兔6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA检测试剂盒Rabbit6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISAKit 96T/48T
苯甲酰新乌头原碱(标准品) Benzoylmesaconine 质量规格:HPLC≥98%,标准品 兔8-异构前列腺素(8-epi-PGF2α)ELISA检测试剂盒Rabbit8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2αELISAKit 96T/48T
葫芦巴碱(标准品) Trigonelline 质量规格:HPLC≥98%,标准品 兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA检测试剂盒RabbitBcl-2AssaciatedXprotein,BAXELISAKit 96T/48T
琥珀酸;丁二酸 Succinic acid 质量规格:AR,>99% 兔p53(p53)ELISA检测试剂盒Rabbitp53/tumorprotein,p53/TP53ELISAKit 96T/48T
琥珀酸;丁二酸(标准品) Succinic acid 质量规格:>99%,标准品 兔p物质(SP)ELISA检测试剂盒RabbitSubstanceP,SPELISAKit 96T/48T
α-乳香酸(标准品) alpha-Boswellic acid 质量规格:HPLC≥98%,标准品 兔β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA检测试剂盒Rabbitamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISAKit 96T/48T
野马追内酯A(标准品) Eupalinolide A 质量规格:HPLC≥98%,标准品 兔阿霉素(ADR)ELISA检测试剂盒Rabbitadramycin,ADRELISAKit 96T/48T
Y1HGold 感受态细胞100ul*50调料三醇比色法定量检测试剂盒20 吉西他滨 Gemcitabine 质量规格:>98%,free base
调料乙醇比色法定量检测试剂盒20 沙利度胺(反应停) Thalidomide 质量规格:>98%
调料乙酸比色法定量检测试剂盒20 沙利度胺(标准品) Thalidomide 质量规格:HPLC>98%,标准品
调料乙酸激酶法定量检测试剂盒20 头孢唑啉,唑啉头孢菌素 Cefazolin 质量规格:>99%,BR
调料总乳酸比色法定量检测试剂盒20 头孢唑啉(标准品) Cefazolin 质量规格:>99%,标准品
同酸待测样品处理试剂盒20 文多灵(标准品) Vindoline 质量规格:HPLC≥98%,标准品
兔6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA检测试剂盒Rabbit6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1a 96T/48T 茶碱(标准品) Theophylline 质量规格:HPLC≥98%,标准品
兔8-异构前列腺素(8-epi-PGF2α)ELISA检测试剂盒Rabbit8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2α 96T/48T 苯甲酰新乌头原碱(标准品) Benzoylmesaconine 质量规格:HPLC≥98%,标准品
兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA检测试剂盒RabbitBcl-2AssaciatedXprotein,BAX 96T/48T 葫芦巴碱(标准品) Trigonelline 质量规格:HPLC≥98%,标准品
兔p53(p53)ELISA检测试剂盒Rabbitp53/tumorprotein,p53/TP53 96T/48T 琥珀酸;丁二酸 Succinic acid 质量规格:AR,>99%
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The methods used to isolate genomic clones of a particular gene have changed significantly over the years. In particular, the characterization of genes with many exons, separated by large introns, increased the need for clones
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;。 ⑥ 因pGBKT7含Kan+抗性基因,在Kan+抗性平板上筛选阳性克隆。 ⑦ 测序验证CaM与gal4 DNA 结合功能区融合,插入序列读框正确、无碱基突变。 2.pGBKT7 – CaM转化酵母菌Y2HGold 将pGBKT7- CaM采用PEG/LiAc法转化酵母菌Y2HGold,涂布于SD – Trp固体培养基上,30° C 3-5天,菌落长出。 进行CaM自激活鉴定及毒性测定。 3.龙须菜高温胁迫表达cDNA文库
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