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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
28
- 英文名:
Y1HGold 感受态细胞
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ul*10
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
产品名称:Y1HGold 感受态细胞100ul*10
规格:100ul*10
分类:酵母感受态细胞
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
Y1HGold 感受态细胞100ul*10注意事项:
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化,转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物,保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 酞菁铜(II)(β-型)(>90.0%(T))Copper(II) Phthalocyanine (β-form)质量规格:>90.0%(T)
小鼠子细胞;U14三(1,3-二苯基-1,3-丙二酮基)(1,10-邻二氮杂菲)铕(Ⅲ)(>95.0%(T))Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)europium(III)质量规格:>95.0%(T)
METAP2 Others Mouse 小鼠 METAP2 / MAP2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 3-(2-苯并噻唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(HPLC)(T))3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin质量规格:>98.0%(HPLC)(T)
CM-M001小鼠肺微血管内皮细胞完全培养基100mL 3-(2-苯并咪唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(T))3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin质量规格:>98.0%(T)
Hela, 人细胞系 小鼠成纤维细胞,3T3TK细胞 SPA-A1(肺腺癌细胞)4,4'-双(5-甲基-2-苯并恶唑基)芪(升华提)(>96.0%(HPLC))4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)质量规格:>96.0%(HPLC)
JEG-3(人绒毛膜癌细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) 轮环藤宁四乙酸/1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸Tetraxetan/DOTA/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid质量规格:>95%
人成骨肉瘤细胞;Saos-2p, p’-DDE(标准品)p, p’-DDE质量规格:分析标准品
PPP3CA Others Human 人 PPP3CA / 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) p, p’-DDE标准溶液(100μg/ml,u=3%)p, p’-DDE solution质量规格:100μg/ml,u=3%
CL-0429Romas(人淋巴瘤细胞)5×106cells/瓶×2敌草腈(标准品)Dichlobenil质量规格:分析标准品
人绒毛膜毛细血管内皮细胞 人胚胎皮肤成纤维细胞,CCC-ESF-1细胞 Sol8(小鼠骨骼肌肌肉母细胞)乙二醇苯(标准品)Ethylene glycol monophenyl ether质量规格:分析标准品,≥99.5%(GC)
土贝母苷丙 HPLC≥98% 10mg HumanBigEndothelin,BigETELISAKit 人大内皮素(BigET)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
土贝母苷甲 HPLC≥98% 20mg HumanBigEndothelin,BigETELISA试剂盒人大内皮素(BigET)ELISA试剂盒规格:96T/48T
土贝母苷乙 HPLC≥98% 20mg HumanBlockingaibody,BAELISA试剂盒人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
土大黄苷 HPLC≥98% 20mg Humanbonealkalinephosphatase,BALPELISA试剂盒人骨碱性0酸酶(BALP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
土槿皮甲酸OβD葡萄糖苷 HPLC≥98% 20mg HumanBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1AELISA试剂盒人骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA试剂盒规格:96T/48T
土槿皮乙酸OβD葡萄糖苷 HPLC≥98% 20mg HumanBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISA试剂盒人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
土荆皮甲酸 HPLC≥98% 10mg HumanBoneMorphogeneticProtein6,BMP-6ELISA试剂盒人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒规格:96T/48T
土荆皮乙酸 HPLC≥98% 20mg Humanbonemorphogeneticproteins,BMPsELISA试剂盒人骨形成蛋白(BMPs)ELISA试剂盒规格:96T/48T
土克甾酮 HPLC≥98% 20mg HumanBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISA试剂盒人骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒规格:96T/48T
土木香内酯 HPLC≥98% 20mg Humanbrainnaiureticpeptide,BNPELISA试剂盒人脑素/脑尿肽(BNP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Y1HGold 感受态细胞100ul*10HumanBigEndothelin,BigET 人大内皮素(BigET)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 土贝母苷丙 HPLC≥98% 10mg
HumanBigEndothelin,BigETELISA试剂盒人大内皮素(BigET)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土贝母苷甲 HPLC≥98% 20mg
HumanBlockingaibody,BAELISA试剂盒人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土贝母苷乙 HPLC≥98% 20mg
Humanbonealkalinephosphatase,BALPELISA试剂盒人骨碱性0酸酶(BALP)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土大黄苷 HPLC≥98% 20mg
HumanBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1AELISA试剂盒人骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土槿皮甲酸OβD葡萄糖苷 HPLC≥98% 20mg
HumanBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISA试剂盒人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土槿皮乙酸OβD葡萄糖苷 HPLC≥98% 20mg
HumanBoneMorphogeneticProtein6,BMP-6ELISA试剂盒人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土荆皮甲酸 HPLC≥98% 10mg
Humanbonemorphogeneticproteins,BMPsELISA试剂盒人骨形成蛋白(BMPs)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土荆皮乙酸 HPLC≥98% 20mg
HumanBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISA试剂盒人骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土克甾酮 HPLC≥98% 20mg
Humanbrainnaiureticpeptide,BNPELISA试剂盒人脑素/脑尿肽(BNP)ELISA试剂盒规格:96T/48T 土木香内酯 HPLC≥98% 20mg
Y1HGold 感受态细胞100ul*10操作说明:
待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖,冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟,待其融化,加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19; --
B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬,DNA 浓度 不超过 100ng/μl,体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖--。
4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推 荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基(室温),用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后,转移到 50ml 离心管(BD Falcon50ml 锥形离心管等),向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃,225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌,重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上(因菌量较大,若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个)。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
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文献和实验Human Y1/Y5 Receptor Gene Cluster: Isolation and Characterization
The methods used to isolate genomic clones of a particular gene have changed significantly over the years. In particular, the characterization of genes with many exons, separated by large introns, increased the need for clones
和标准品浓度 第二步:选择拟合曲线类型 选中输入的数值框,按如下操作依次点击选项。 第三步:勾选“find specific X/Y” 完成上述操作后,点击 Fit 按键,拟合曲线和相关信息将自动生成(如第四步所示) 第四步:查看标准曲线信息(如参数值,R-Square等) 第五步:设置坐标轴类型为对数。 双击第四步中的拟合曲线图,对其进行编辑。双击X 轴、Y 轴设置坐标类型为“Log10”。 第六步:根据标准曲线计算样本浓度 选择第四个工作表(Fit NLF Find X from Y1
;。 ⑥ 因pGBKT7含Kan+抗性基因,在Kan+抗性平板上筛选阳性克隆。 ⑦ 测序验证CaM与gal4 DNA 结合功能区融合,插入序列读框正确、无碱基突变。 2.pGBKT7 – CaM转化酵母菌Y2HGold 将pGBKT7- CaM采用PEG/LiAc法转化酵母菌Y2HGold,涂布于SD – Trp固体培养基上,30° C 3-5天,菌落长出。 进行CaM自激活鉴定及毒性测定。 3.龙须菜高温胁迫表达cDNA文库
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