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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
52
- 英文名:
EHA105(pSoup) 感受态细胞
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ul*10
| 产品名称 | 包装 | 分类 |
| EHA105(pSoup) 感受态细胞100ul*10 | 100ul*10 | 根癌农杆菌感受态细胞 |
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
同一批感受态细胞,用含目的片段的T载体质粒转化(阳性对照)能长出密密麻麻的菌落,而用另一种载体和目的片段的连接产物转化,却一个菌都没长出来,重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关,还是连接出了问题?哪个可能性大些?
答:应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照,确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了,还能用来转化质粒吗?
答:如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况,是可以用来转化的,但是由于冻存时间过长,转化效率会有所下降,如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的,如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
ACVR1B Others Human 人 ALK4 / ACVR1B 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸布比卡因(标准品)Bupivacaine Hydrochloride Monohydrate质量规格:含量测定
胰腺星状细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)双环醇(标准品)Bicyclol质量规格:含量测定
IRAK4 Others Human 人 IRAK4 / IRAK-4 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸贝尼地平(标准品)Benidipine Hydrochloride质量规格:含量测定
大鼠胰腺外分泌腺细胞;AR42J甲异靛(标准品)Meisoindigo质量规格:供UV法含量测定用
MCF7细胞,癌细胞 人肝癌细胞,QGY-7701细胞 T-108B胶原酶(含100mL酶解缓冲液)10mL盐酸丁螺环酮(标准品)Buspirone Hydrochloride质量规格:含量测定
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PLA2G2E Others Mouse 小鼠 PLA2G2E 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿托伐他汀甲酯Atorvastatin Methyl Ester质量规格:美国进口
U973 人白血病细胞氮卓斯汀-13C,d3Azelastine-13C,d3质量规格:美国进口
CL-0344HAN(人羊膜细胞)5×106cells/瓶×2N-去甲氮卓斯汀N-Desmethyl Azelastine质量规格:美国进口
香豆素120;7-氨基-4-甲基香豆素(AMC) 7-Amino-4-methylcoumarin 质量规格:>97% 人动力蛋白轻链1,细胞质(DYNLL1/DLC1/DNCL1/DNCLC1/HDLC1)免疫试剂盒 Human DYNLL1 ELISA kit
Duvelisib (IPI-145) IPI-145 (INK1197) 质量规格:>98%,选择性的PI3K δ/γ抑制剂 人毒性休克综合征毒素1(TSST-1)ELISA检测试剂盒Humaoxicshocksyndrometoxin,TSST-1ELISAKit 96T/48T
5--4-氯-3吲哚神经氨酸钠盐 X-NeuNAc 质量规格:>98%,美国进口 人毒蕈碱型乙酰胆碱受体M2(mAChRM2)自身抗体免疫试剂盒 Human muscarinic acetylcholine receptor M2(mAChRM2)aoaibody ELISA kit
ABEI;N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺 N-(4-Aminobutyl)-N-ethylisoluminol 质量规格:>97%,进分 人端粒保护蛋白1(POT1)免疫试剂盒 Human POT1 ELISA kit
TTAC;十四烷基三甲基氯化铵 Tetradecyltrimethylammonium chloride 质量规格:>99%,AR 人端粒酶(TE)免疫试剂盒 Human telomerase,TE ELISA Kit
DTAC;十二烷基三甲基氯化铵 Dodecyltrimethylammonium chloride(DTAC) 质量规格:>99%,BR 人端粒酶逆转录酶(TE)免疫试剂盒 Human TE ELISA Kit
CTAC;十六烷基三甲基氯化铵 CTAC 质量规格:>99% 人端粒重复序列结合因子1(TERF1)免疫试剂盒 Human TERF1 ELISA kit
十八烷基三甲基氯化铵 Stearyl Trimethyl Ammoium Chloride(STAC) 质量规格:>99%,BR 人端粒重复序列结合因子2(TERF2)免疫试剂盒 Human TERF2 ELISA kit
十烷基三甲基氯化铵 Decyltrimethylammonium chloride 质量规格:>99% 人对(PABA)ELISA检测试剂盒Humanpara-aminobenzoicacid,PABAELISAKit 96T/48T
辛基三甲基氯化铵;八烷基三甲基氯化铵 Trimethyloctylammonium chloride 质量规格:>99%,BR 人对(PABA)免疫试剂盒 Human para-aminobenzoic acid,PABA ELISA Kit
EHA105(pSoup) 感受态细胞100ul*10人丁型肝炎IgM(HDV IgM)免疫试剂盒 Human Hepatitis D virus IgM,HDV IgM ELISA Kit Fluo-3 AM;钙荧光探针 Fluo 3-AM 质量规格:>90%,进口
人丁型肝炎病毒(HDV)抗原免疫试剂盒 Human hepatitis D virus(HDV) aigen ELISA Kit Indo 1-AM;钙荧光探针 Indo 1-AM 质量规格:>95%,进口
人丁型肝炎病毒抗体(HDV aibody)免疫试剂盒 Human hepatitis D virus aibody,HDV aibody ELISA Kit Fluo 4-AM;钙荧光探针 Fluo 4-AM 质量规格:>95%,进口
人动力蛋白轻链1,细胞质(DYNLL1/DLC1/DNCL1/DNCLC1/HDLC1)免疫试剂盒 Human DYNLL1 ELISA kit 香豆素120;7-氨基-4-甲基香豆素(AMC) 7-Amino-4-methylcoumarin 质量规格:>97%
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人端粒酶(TE)免疫试剂盒 Human telomerase,TE ELISA Kit TTAC;十四烷基三甲基氯化铵 Tetradecyltrimethylammonium chloride 质量规格:>99%,AR
人端粒酶逆转录酶(TE)免疫试剂盒 Human TE ELISA Kit DTAC;十二烷基三甲基氯化铵 Dodecyltrimethylammonium chloride(DTAC) 质量规格:>99%,BR
人端粒重复序列结合因子1(TERF1)免疫试剂盒 Human TERF1 ELISA kit CTAC;十六烷基三甲基氯化铵 CTAC 质量规格:>99%
EHA105(pSoup) 感受态细胞100ul*10操作方法:
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
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文献和实验双元载体的农杆菌转化1.1农杆菌感受态细胞的制备1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线,28℃培养。1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中,220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中,28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。1.1.4. 转入无菌离心管,5000rpm离心5min,去上清液。1.1.5. 加入10ml预冷的0.1M的CaCl2溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置
一.农杆菌感受态细胞的制备 (同大肠杆菌质粒DNA的提取),然后将其转化大肠杆菌,再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线,28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM(0.5g/L KH2 PO4 ,10 g/L Mannitol,2 g/L L-Glutamine,0.2 g/L NaCL,0.2 g/L MgSO4 ,0.3 g/L Yeast extract,PH7.0)液体培养基中,220rpm,28℃振荡培养18 hr
Genetic Transformation of Switchgrass
by Agrobacterium tumefaciens -mediated transformation. Embryogenic calluses induced from caryopses or inflorescences were used as explants for inoculation with A. tumefaciens strain EHA105. Hygromycin phosphotransferase gene (hph ) was used as the selectable marker
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