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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Tuner(DE3) 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ul*10
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
产品描述：
| 产品名称 | 包装 | 分类 |
| Tuner(DE3) 感受态细胞100ul*10 | 100ul*10 | 表达感受态细胞 |
Tuner(DE3) 感受态细胞100ul*10操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
人正常上皮细胞;MCF 10A盐酸普罗帕酮Propafenone Hydrochloride质量规格：>98%,BR
PRLR Others Mouse 小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) 呫吨酸（标准品）Xanthene-9-carboxylic acid质量规格：供检查用
原代神经元细胞特制基础培养基Many types of cells包装：500/250/100ml呫吨酮（标准品）Xanthone质量规格：供HPLC法有关物质检查用
CD40LG Others Human 人 CD40L / CD154 / TNFSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) 甲基丁香酚（标准品）Methyl eugenol质量规格：含量测定
Marc145 猴胚胎肾上皮细胞香叶醇（标准品）Geraniol质量规格：含量测定
K-562(人慢性骨髓性白血病细胞) 5×106cells/瓶×2白当归脑(标准品)Byakangelicol质量规格：HPLC≥98%，标准品
Promocell C-25120 Hepatocyte Maienance MediumKIT, 肝细胞维持培养液套装 500ml白当归素(标准品）Byakangelicin质量规格：HPLC≥98%，标准品
人肝细胞;QSG-7701 [QSG7701]白果内酯(标准品)(−)-Bilobalide质量规格：HPLC≥98%，标准品
EFNB2 Others Canine 狗 Ephrin-B2 / EFNB2 人细胞裂解液 (阳性对照) 白花前胡醇（标准品）Peucedanol质量规格：HPLC≥98%，标准品
猕猴皮肤细胞;MMS7环杷明;环巴胺;去氧芥芬胺(标准品）Cyclopamine质量规格：HPLC≥98%,标准品;Hh信号通路拮抗剂,作用于Smo
盐酸奥昔布宁 Oxybutynin HCl 质量规格：Purity>99.0%;毒蕈碱型乙酰胆碱受体拮抗剂 大米蛋白生物萃取试剂盒20
盐酸奥昔布宁(标准品) Oxybutynin HCl 质量规格：>98%,标准品 大米淀粉化学萃取试剂盒20
盐酸帕罗西汀 Paroxetine HCl 质量规格：>98%,半水合物 大米淀粉生物萃取试剂盒20
盐酸帕罗西汀(标准品) Paroxetine HCl 质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠(EPI)ELISA检测试剂盒RatEpinephrine/Adrenaline,EPIELISAKit 96T/48T
吡罗昔康 Piroxicam 质量规格：>97%,USP grade 大鼠(EPI)免疫试剂盒 Rat Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit
吡罗昔康(标准品) Piroxicam 质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠(HYD)ELISA检测试剂盒RatHydrocoisone,HYDELISAKit 96T/48T
泊沙康唑 Posaconazole 质量规格：>99% 大鼠(HYD)免疫试剂盒 Rat Hydrocoisone,HYD ELISA Kit
泊沙康唑(标准品) Posaconazole 质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠(NO)免疫试剂盒 Rat niic oxide,NO ELISA Kit
利福昔明 Rifaximin 质量规格：>98.0%,可用于细胞培养 大鼠0蛋白关联鞘糖脂微区1(PAG1)免疫试剂盒 Rat PAG1 ELISA kit
利福昔明(标准品) Rifaximin 质量规格：>98%,标准品 大鼠0酸化Tau蛋白(pMAPT/pTAU)免疫试剂盒 Rat phosphorylated microtubule-associated protein tau,pMAPT/pTAU ELISA kit
Tuner(DE3) 感受态细胞100ul*10大米蛋白化学萃取试剂盒20(10克/) 盐酸奥洛他定(标准品) Olopatadine HCl 质量规格：HPLC>98%,标准品
大米蛋白生物萃取试剂盒20 盐酸奥昔布宁 Oxybutynin HCl 质量规格：Purity>99.0%;毒蕈碱型乙酰胆碱受体拮抗剂
大米淀粉化学萃取试剂盒20 盐酸奥昔布宁(标准品) Oxybutynin HCl 质量规格：>98%,标准品
大米淀粉生物萃取试剂盒20 盐酸帕罗西汀 Paroxetine HCl 质量规格：>98%,半水合物
大鼠(EPI)ELISA检测试剂盒RatEpinephrine/Adrenaline,EPI 96T/48T 盐酸帕罗西汀(标准品) Paroxetine HCl 质量规格：HPLC>98%,标准品
大鼠(EPI)免疫试剂盒 Rat Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit 吡罗昔康 Piroxicam 质量规格：>97%,USP grade
大鼠(HYD)ELISA检测试剂盒RatHydrocoisone,HYD 96T/48T 吡罗昔康(标准品) Piroxicam 质量规格：HPLC>98%,标准品
大鼠(HYD)免疫试剂盒 Rat Hydrocoisone,HYD ELISA Kit 泊沙康唑 Posaconazole 质量规格：>99%
大鼠(NO)免疫试剂盒 Rat niic oxide,NO ELISA Kit 泊沙康唑(标准品) Posaconazole 质量规格：HPLC>98%,标准品
大鼠0蛋白关联鞘糖脂微区1(PAG1)免疫试剂盒 Rat PAG1 ELISA kit 利福昔明 Rifaximin 质量规格：>98.0%,可用于细胞培养
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文献和实验（ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner
High Level Expression of Recombinant Proteins in E. coli
) plus pRARE Tuner(DE3) lacZY deletion mutant ADA494(DE3) trxB mutant Origami(DE3) trxB and gor mutations Expression Plasmid Elements Origin of Replication (ColE1) Selectable marker (ampicillin, kanamycin or chloramphenicol resistance)
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择，现系统地解答一下，供新手借鉴。
以 AccepTor TM 载体或 perfectly Blunt a 载体形式提供，便于快速 PCR 克隆 · 目标基因无基础水平表达，消除了毒性基因产物相关的质粒不稳定性 · 表达水平与经典 pET 载体相同 · 用 Tuner TM (DE3)pLacI 宿主菌实现真正的表达水平“变阻器”控制。 PET 系统：大肠杆菌中蛋白表达的金字招牌 pET 载体中，目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录和翻译信号控制之下，并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达。 Novagen
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