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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
1200
- 英文名：
DH10Bac 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ul*10
DH10Bac 感受态细胞100ul*10培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：DH10Bac 感受态细胞100ul*10
规格：100ul*10
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
DH10Bac 感受态细胞100ul*10注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
CL-0077Eca-109(人食管癌细胞)5×106cells/瓶×2吲哚菁绿Indocyanine Green质量规格：>94%,BS
Wish细胞，人羊膜细胞系 人T细胞淋巴瘤,Hat-78细胞 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A2靛蓝Indigotin质量规格：BS
BGC823(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2甲基蓝Methyl blue质量规格：AR
CTSB Others Human 人 Cathepsin-B / CTSB 人细胞裂解液 (阳性对照) 伊文思蓝；埃文斯蓝Evans Blue质量规格：BS,进分BIOFER,>85%
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-p7曲利苯蓝Trypan Blue质量规格：BS
人关节软骨细胞完全培养基 100mL醋酸氟氢可的(标准品)Fludrocortisone acetate质量规格：含量97%-103%,标准品
Vero细胞，绿猴肾细胞 RSC96(大鼠雪旺细胞) 小鼠肉瘤瘤株;S180醋酸氟氢可的Fludrocortisone acetate质量规格：>97%
EFNB2 Protein Human 重组人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白阿折地平Azelnidipine质量规格：>99%,BR
U-937(人组织细胞淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠淋巴瘤细胞;EL4噻奈普汀酸;噻奈普汀Tianeptine质量规格：>98%,BR
人结肠平滑肌细胞裂解物HCSMCL噻奈普汀酸;噻奈普汀(标准品)Tianeptine质量规格：HPLC>99%,标准品
银椴苷 HPLC≥98% 20mg MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISA试剂盒猴载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏酚酸 HPLC≥98% 20mg MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISA试剂盒猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏内酯A HPLC≥98% 20mg MonkeyBvirusInfectionsELISA试剂盒猴B病毒(BV)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏内酯B HPLC≥98% 20mg MonkeyCollageypeⅣ,ColⅣELISA试剂盒猴Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏内酯C HPLC≥98% 20mg MonkeyHyaluronicacid,HAELISA试剂盒猴透明质酸(HA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏内酯J HPLC≥98% 20mg MonkeyIerferonγ,IFN-γELISA试剂盒猴γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏双黄酮 HPLC≥98% 10mg MonkeyIerleukin2,IL-2ELISA试剂盒猴白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
吲哚醇 HPLC≥98% 20mg MonkeyIerleukin4,IL-4ELISA试剂盒猴白介素4(IL-4)ELISA试剂盒规格：96T/48T
隐丹参酮 HPLC≥98% 20mg MonkeyIerleukin6,IL-6ELISA试剂盒猴白介素6(IL-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T
隐绿原酸 HPLC≥98% 20mg MonkeyInsulin,INSELISA试剂盒猴胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
DH10Bac 感受态细胞100ul*10MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISA试剂盒猴载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银椴苷 HPLC≥98% 20mg
MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISA试剂盒猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏酚酸 HPLC≥98% 20mg
MonkeyBvirusInfectionsELISA试剂盒猴B病毒(BV)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏内酯A HPLC≥98% 20mg
MonkeyCollageypeⅣ,ColⅣELISA试剂盒猴Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏内酯B HPLC≥98% 20mg
MonkeyHyaluronicacid,HAELISA试剂盒猴透明质酸(HA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏内酯C HPLC≥98% 20mg
MonkeyIerferonγ,IFN-γELISA试剂盒猴γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏内酯J HPLC≥98% 20mg
MonkeyIerleukin2,IL-2ELISA试剂盒猴白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏双黄酮 HPLC≥98% 10mg
MonkeyIerleukin4,IL-4ELISA试剂盒猴白介素4(IL-4)ELISA试剂盒规格：96T/48T 吲哚醇 HPLC≥98% 20mg
MonkeyIerleukin6,IL-6ELISA试剂盒猴白介素6(IL-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T 隐丹参酮 HPLC≥98% 20mg
MonkeyInsulin,INSELISA试剂盒猴胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T 隐绿原酸 HPLC≥98% 20mg
DH10Bac 感受态细胞100ul*10操作说明：
1. 0.1
cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙醇充分挥发，
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：DH10Bac 感受态细胞100ul*10
规格：100ul*10
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
DH10Bac 感受态细胞100ul*10注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
CL-0077Eca-109(人食管癌细胞)5×106cells/瓶×2吲哚菁绿Indocyanine Green质量规格：>94%,BS
Wish细胞，人羊膜细胞系 人T细胞淋巴瘤,Hat-78细胞 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A2靛蓝Indigotin质量规格：BS
BGC823(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2甲基蓝Methyl blue质量规格：AR
CTSB Others Human 人 Cathepsin-B / CTSB 人细胞裂解液 (阳性对照) 伊文思蓝；埃文斯蓝Evans Blue质量规格：BS,进分BIOFER,>85%
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-p7曲利苯蓝Trypan Blue质量规格：BS
人关节软骨细胞完全培养基 100mL醋酸氟氢可的(标准品)Fludrocortisone acetate质量规格：含量97%-103%,标准品
Vero细胞，绿猴肾细胞 RSC96(大鼠雪旺细胞) 小鼠肉瘤瘤株;S180醋酸氟氢可的Fludrocortisone acetate质量规格：>97%
EFNB2 Protein Human 重组人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白阿折地平Azelnidipine质量规格：>99%,BR
U-937(人组织细胞淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠淋巴瘤细胞;EL4噻奈普汀酸;噻奈普汀Tianeptine质量规格：>98%,BR
人结肠平滑肌细胞裂解物HCSMCL噻奈普汀酸;噻奈普汀(标准品)Tianeptine质量规格：HPLC>99%,标准品
银椴苷 HPLC≥98% 20mg MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISA试剂盒猴载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏酚酸 HPLC≥98% 20mg MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISA试剂盒猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏内酯A HPLC≥98% 20mg MonkeyBvirusInfectionsELISA试剂盒猴B病毒(BV)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏内酯B HPLC≥98% 20mg MonkeyCollageypeⅣ,ColⅣELISA试剂盒猴Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏内酯C HPLC≥98% 20mg MonkeyHyaluronicacid,HAELISA试剂盒猴透明质酸(HA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏内酯J HPLC≥98% 20mg MonkeyIerferonγ,IFN-γELISA试剂盒猴γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
银杏双黄酮 HPLC≥98% 10mg MonkeyIerleukin2,IL-2ELISA试剂盒猴白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
吲哚醇 HPLC≥98% 20mg MonkeyIerleukin4,IL-4ELISA试剂盒猴白介素4(IL-4)ELISA试剂盒规格：96T/48T
隐丹参酮 HPLC≥98% 20mg MonkeyIerleukin6,IL-6ELISA试剂盒猴白介素6(IL-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T
隐绿原酸 HPLC≥98% 20mg MonkeyInsulin,INSELISA试剂盒猴胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
DH10Bac 感受态细胞100ul*10MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISA试剂盒猴载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银椴苷 HPLC≥98% 20mg
MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISA试剂盒猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏酚酸 HPLC≥98% 20mg
MonkeyBvirusInfectionsELISA试剂盒猴B病毒(BV)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏内酯A HPLC≥98% 20mg
MonkeyCollageypeⅣ,ColⅣELISA试剂盒猴Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏内酯B HPLC≥98% 20mg
MonkeyHyaluronicacid,HAELISA试剂盒猴透明质酸(HA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏内酯C HPLC≥98% 20mg
MonkeyIerferonγ,IFN-γELISA试剂盒猴γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏内酯J HPLC≥98% 20mg
MonkeyIerleukin2,IL-2ELISA试剂盒猴白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T 银杏双黄酮 HPLC≥98% 10mg
MonkeyIerleukin4,IL-4ELISA试剂盒猴白介素4(IL-4)ELISA试剂盒规格：96T/48T 吲哚醇 HPLC≥98% 20mg
MonkeyIerleukin6,IL-6ELISA试剂盒猴白介素6(IL-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T 隐丹参酮 HPLC≥98% 20mg
MonkeyInsulin,INSELISA试剂盒猴胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T 隐绿原酸 HPLC≥98% 20mg
DH10Bac 感受态细胞100ul*10操作说明：
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
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ws 各位站友，本人因克隆某个植物抗病基因而完成了其BAC文库，目前正在做图位克隆的工作。 但文库的完成耗费了大量人力、物力和财力，因此想请教下该库还有什么其它用途。或与其 它技术结合，可开展什么工作。 谢谢了。。。。 zhujoker BAC (Bacterial Artificial Chromosome, 细菌人工染色体)文库是进行全基因组测序、构建物理图谱、染色体步
BAC Manipulations for Making BAC Transgene Arrays
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Prior to getting cells:1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg.2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice.3) One tube of cells is good for several transformations.For two transformations:1) Put 10 μl of your ligation
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