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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
52
- 英文名:
BL21(DE3) 感受态细胞
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ul*50
规格:100ul*50
分类:表达感受态细胞
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50注意事项:
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化,转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物,保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50操作说明:
待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖,冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟,待其融化,加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19; --
B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬,DNA 浓度 不超过 100ng/μl,体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖--。
4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推 荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基(室温),用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后,转移到 50ml 离心管(BD Falcon50ml 锥形离心管等),向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃,225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌,重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上(因菌量较大,若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个)。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
MRC-5(人胚肺成纤维细胞 ) 5×106cells/瓶×2 小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 人细胞裂解液 (阳性对照) 依他尼酸(标准品)Ethacrynic acid质量规格:供检查用
正常大鼠肾细胞;NRK盐酸马普替林(标准品)Maprotiline hydrochloride质量规格:含量测定
心肌细胞 (HCMa) (1×106 )盐酸肼屈嗪(标准品)Hydralazine hydrochloride质量规格:含量测定
T-110A透明质酸酶(含10mL酶解缓冲液)1mL盐酸羟嗪(标准品)Hydroxyzine dihydrochloride质量规格:含量测定
小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NY 小鼠肺大静脉平滑肌细胞完全培养基 100mL金诺芬(标准品)Auranofin质量规格:含量测定
RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 铋酸钠(>80%,BC)Sodium bismuthate质量规格:>80%,BC
人海马趾星形胶质细胞RNAHA-h miRNA5 μg泛影酸钠(>98%,BC)Sodium diatrizoate dihydrate质量规格:>98%,BC
小鼠中脑缝神经细胞(脑脊)(MN-r)(1×106)氟铝酸钠(>98%,BR)Sodium fluoroaluminate质量规格:>98%,BR
兔肾细胞;RK13马尿酸钠(>98%,BR)Sodium hippurate质量规格:>98%,BR
BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.1 小鼠成骨细胞完全培养基 100mL钠(>95%,BR)Sodium laurate质量规格:>95%,BR
盐酸依匹斯汀 Epinastine HCl 质量规格:>98%,BR 化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)10微克
盐酸依匹斯汀(标准品) Epinastine HCl 质量规格:>99%,标准品 化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)测序引物对2OD
依普利酮 Eplerenone 质量规格:>99%,BR,可用于细胞培养 化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)10微克
依普利酮(标准品) Eplerenone 质量规格:HPLC>98%,标准品 化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)测序引物对2OD
*度酸 Etodolac 质量规格:>98.5%,BR 化溶酶体功能中性红检测试剂盒20
*度酸(标准品) Etodolac 质量规格:HPLC>98%,标准品 化微粒体0脂酶D(PhospholipaseD)总活性比色法定量检测试剂盒20
*孕烯 Etonogestrel 质量规格:>98% 化微粒体0脂酶D(PhospholipaseD)总活性荧光定量检测试剂盒20
依维莫司 Everolimus;RAD001 质量规格:>95%,mTOR抑制剂,BR 化微粒体0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量检测试剂盒20
醋酸氟轻松;醋酸肤轻松 Fluocinolone Acetonide 质量规格:>98%,BR 化微粒体0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性荧光定量检测试剂盒20
醋酸氟轻松;醋酸肤轻松(标准品) Fluocinolone Acetonide 质量规格:HPLC>98%,标准品 化微粒体0脂酶D2(PhospholipaseD2)活性比色法定量检测试剂盒20
BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50化人体RUNX3基因重组表达载体(pcDNA-RUNX3)测序引物对2OD 氢化奎宁定;双氢奎尼丁 Hydroquinidine 质量规格:>95%
化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)10微克 盐酸依匹斯汀 Epinastine HCl 质量规格:>98%,BR
化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)测序引物对2OD 盐酸依匹斯汀(标准品) Epinastine HCl 质量规格:>99%,标准品
化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)10微克 依普利酮 Eplerenone 质量规格:>99%,BR,可用于细胞培养
化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)测序引物对2OD 依普利酮(标准品) Eplerenone 质量规格:HPLC>98%,标准品
化溶酶体功能中性红检测试剂盒20 *度酸 Etodolac 质量规格:>98.5%,BR
化微粒体0脂酶D(PhospholipaseD)总活性比色法定量检测试剂盒20 *度酸(标准品) Etodolac 质量规格:HPLC>98%,标准品
化微粒体0脂酶D(PhospholipaseD)总活性荧光定量检测试剂盒20 *孕烯 Etonogestrel 质量规格:>98%
化微粒体0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量检测试剂盒20 依维莫司 Everolimus;RAD001 质量规格:>95%,mTOR抑制剂,BR
化微粒体0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性荧光定量检测试剂盒20 醋酸氟轻松;醋酸肤轻松 Fluocinolone Acetonide 质量规格:>98%,BR
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文献和实验(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1 2:BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3
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【交流】转载:JM109,DH5a,BL21这些感受态有何区别
1:DH5a菌株 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。 基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1 2:BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动
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