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BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50

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  • BH-G2111
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  • 2025年07月16日
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    • 英文名

      BL21(DE3) 感受态细胞

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海博湖

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

      100ul*50

    产品名称:BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50
    规格:100ul*50
    分类:表达感受态细胞
    保存条件(保质期):   -806个月)

    产品细节图片1
    BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50培养基及培养冻存条件准备:
    1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640GIBCO,货号21875-091)90%;优质胎牛血清,10%
    2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5% 温度:37,培养箱湿度为70%-80%
    3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
    BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50注意事项:
    1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10--
    2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。
    3.   DNA 不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。 
    4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
    5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个 数量级。 --
    6. 对于连接产物转化,转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物,保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。
    7. 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm)  避免用
    力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
    8.电击感受态细胞保存在-80以下,高于-80超期储存会导致转化效率会下降。
    BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50操作说明:
    1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟,待其沥干水分,正置 5 分钟,使乙醇充分挥发,
    待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖,冰中静置 5 分钟充分降温。
    2. -80保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟,待其融化,加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。 --
    A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19   --
    B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬,DNA 浓度 不超过 100ng/μl,体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
    3. 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖--
    4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μFPC=200 ΩV=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推 荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。--
    5. 2 分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基(室温),用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后,转移到 50ml 离心管(BD Falcon50ml 锥形离心管等),向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml 37225 rpm 复苏 60 分钟。--
    6. 5000rpm 离心一分钟收菌,重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上(因菌量较大,若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个)。将平板倒置放于 37培养箱过夜培养 13-17 小时。
    MRC-5(人胚肺成纤维细胞 ) 5×106cells/瓶×2 小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 人细胞裂解液 (阳性对照) 依他尼酸(标准品)Ethacrynic acid质量规格:供检查用

    正常大鼠肾细胞;NRK盐酸马普替林(标准品)Maprotiline hydrochloride质量规格:含量测定
    心肌细胞 (HCMa) (1×106 )盐酸肼屈嗪(标准品)Hydralazine hydrochloride质量规格:含量测定
    T-110A透明质酸酶(10mL酶解缓冲液)1mL盐酸羟嗪(标准品)Hydroxyzine dihydrochloride质量规格:含量测定
    小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NY 小鼠肺大静脉平滑肌细胞完全培养基 100mL金诺芬(标准品)Auranofin质量规格:含量测定
    RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 铋酸钠(>80%,BC)Sodium bismuthate质量规格:>80%,BC

    人海马趾星形胶质细胞RNAHA-h miRNA5 μg泛影酸钠(>98%,BC)Sodium diatrizoate dihydrate质量规格:>98%,BC
    小鼠中脑缝神经细胞(脑脊)(MN-r)(1×106)氟铝酸钠(>98%,BR)Sodium fluoroaluminate质量规格:>98%,BR
    兔肾细胞;RK13马尿酸钠(>98%,BR)Sodium hippurate质量规格:>98%,BR
    BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.1 小鼠成骨细胞完全培养基 100mL(>95%,BR)Sodium laurate质量规格:>95%,BR
    盐酸依匹斯汀  Epinastine HCl  质量规格:>98%,BR 化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)10微克

    盐酸依匹斯汀(标准品)  Epinastine HCl  质量规格:>99%,标准品 化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)测序引物对2OD
    依普利酮  Eplerenone  质量规格:>99%,BR,可用于细胞培养 化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)10微克
    依普利酮(标准品)  Eplerenone  质量规格:HPLC>98%,标准品 化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)测序引物对2OD
    *度酸  Etodolac  质量规格:>98.5%,BR 化溶酶体功能中性红检测试剂盒20
    *度酸(标准品)  Etodolac  质量规格:HPLC>98%,标准品 化微粒体0脂酶D(PhospholipaseD)总活性比色法定量检测试剂盒20
    *孕烯  Etonogestrel  质量规格:>98% 化微粒体0脂酶D(PhospholipaseD)总活性荧光定量检测试剂盒20
    依维莫司  Everolimus;RAD001  质量规格:>95%,mTOR抑制剂,BR 化微粒体0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量检测试剂盒20
    醋酸氟轻松;醋酸肤轻松  Fluocinolone Acetonide  质量规格:>98%,BR 化微粒体0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性荧光定量检测试剂盒20
    醋酸氟轻松;醋酸肤轻松(标准品)  Fluocinolone Acetonide  质量规格:HPLC>98%,标准品 化微粒体0脂酶D2(PhospholipaseD2)活性比色法定量检测试剂盒20
    BL21(DE3) 感受态细胞100ul*50化人体RUNX3基因重组表达载体(pcDNA-RUNX3)测序引物对2OD 氢化奎宁定;双氢奎尼丁  Hydroquinidine  质量规格:>95%

    化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)10微克 盐酸依匹斯汀  Epinastine HCl  质量规格:>98%,BR
    化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)测序引物对2OD 盐酸依匹斯汀(标准品)  Epinastine HCl  质量规格:>99%,标准品
    化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)10微克 依普利酮  Eplerenone  质量规格:>99%,BR,可用于细胞培养
    化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)测序引物对2OD 依普利酮(标准品)  Eplerenone  质量规格:HPLC>98%,标准品
    化溶酶体功能中性红检测试剂盒20 *度酸  Etodolac  质量规格:>98.5%,BR
    化微粒体0脂酶D(PhospholipaseD)总活性比色法定量检测试剂盒20 *度酸(标准品)  Etodolac  质量规格:HPLC>98%,标准品
    化微粒体0脂酶D(PhospholipaseD)总活性荧光定量检测试剂盒20 *孕烯  Etonogestrel  质量规格:>98%
    化微粒体0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量检测试剂盒20 依维莫司  Everolimus;RAD001  质量规格:>95%,mTOR抑制剂,BR
    化微粒体0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性荧光定量检测试剂盒20 醋酸氟轻松;醋酸肤轻松  Fluocinolone Acetonide  质量规格:>98%,BR
     

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