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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
29
- 英文名：
TOP10 电击感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50ul*5
TOP10 电击感受态细胞50ul*5培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：TOP10 电击感受态细胞50ul*5
规格：50ul*5
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
TOP10 电击感受态细胞50ul*5注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
EGFL6 Protein Human 重组人 EGFL6 / EGF-L6 蛋白 (His 标签)竹节香附素A(标准品)Raddeanin A质量规格：HPLC≥98%，标准品
MDA-MB-468(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 脑静脉血管平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)梓醇（标准品）Catalpol质量规格：HPLC≥98%，标准品
转PYTL基因小鼠支持细胞;15P-1紫草素,左旋紫草素(标准品)Shikonin质量规格：HPLC≥98%，标准品
人小梁网细胞(HTMC)(5×105)紫草酸（标准品）Lithospermic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品
CM-M011小鼠肺大动脉内皮细胞完全培养基100mL紫丁香酚苷（标准品）Syringin质量规格：HPLC≥98%，标准品
鱼源细胞地奈德标记13C3Desonide - Labeled 13C3质量规格：美国进口
DPP4 Others Human 人 DPPIV / DPP4 / CD26 人细胞裂解液 (阳性对照) L-顺式-盐酸地尔硫卓L-cis-Diltiazem • HCl质量规格：美国进口
人卵巢表层上皮细胞HOSEpiC地尔硫卓Diltiazem质量规格：美国进口
PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 去乙酰地尔硫卓-d3Desacetyl Diltiazem-d3质量规格：美国进口
大鼠肠平滑肌细胞完全培养基 100mLO-去甲基地尔硫卓O-Desmethyl Diltiazem质量规格：美国进口
紫背金牛酸 HPLC≥98% 5mg Rat follistatin (FS) ELISA Kit 大鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒
紫丹参萜醚 HPLC≥98% 5mg Rat fractalkine (FK) ELISA Kit 大鼠趋化因子(FK)ELISA试剂盒
紫铆因 HPLC≥98% 5mg Rat galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 大鼠甘肽/甘素(GAL)ELISA试剂盒
紫杉素 B HPLC≥98% 5mg Rat Gao Min three iodothyronine (u-T3) ELISA Kit 大鼠高敏三甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒
左旋哈氏豆属酸 HPLC≥98% 5mg Rat gelsolin (Gelsolin) ELISA Kit 大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)ELISA试剂盒
左旋马尾松树脂醇 HPLC≥98% 5mg Rat glamic acid decarboxylase aoaibody (GAD-Ab) ELISA Kit 大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒
()N甲基石榴碱 HPLC≥98% 5mg Rat Glucose depende insulinoopic polypeptide (GIP) ELISA Kit 大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒
()vibo环己五醇 HPLC≥98% 5mg Rat granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒
()白花前胡甲素 HPLC≥98% 5mg Rat Granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒
()白花前胡乙素 HPLC≥98% 5mg Rat granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 大鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒
TOP10 电击感受态细胞50ul*5Rat factor related apoptosis inducing ligand (FASL) ELISA Kit 大鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒 梓木内酯 HPLC≥98% 5mg
Rat follistatin (FS) ELISA Kit 大鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒 紫背金牛酸 HPLC≥98% 5mg
Rat fractalkine (FK) ELISA Kit 大鼠趋化因子(FK)ELISA试剂盒 紫丹参萜醚 HPLC≥98% 5mg
Rat galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 大鼠甘肽/甘素(GAL)ELISA试剂盒 紫铆因 HPLC≥98% 5mg
Rat Gao Min three iodothyronine (u-T3) ELISA Kit 大鼠高敏三甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒 紫杉素 B HPLC≥98% 5mg
Rat gelsolin (Gelsolin) ELISA Kit 大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)ELISA试剂盒 左旋哈氏豆属酸 HPLC≥98% 5mg
Rat glamic acid decarboxylase aoaibody (GAD-Ab) ELISA Kit 大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒 左旋马尾松树脂醇 HPLC≥98% 5mg
Rat Glucose depende insulinoopic polypeptide (GIP) ELISA Kit 大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒 ()N甲基石榴碱 HPLC≥98% 5mg
Rat granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒 ()vibo环己五醇 HPLC≥98% 5mg
Rat Granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒 ()白花前胡甲素 HPLC≥98% 5mg
TOP10 电击感受态细胞50ul*5操作说明：
1. 0.1
cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙醇充分挥发，
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：TOP10 电击感受态细胞50ul*5
规格：50ul*5
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
TOP10 电击感受态细胞50ul*5注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
EGFL6 Protein Human 重组人 EGFL6 / EGF-L6 蛋白 (His 标签)竹节香附素A(标准品)Raddeanin A质量规格：HPLC≥98%，标准品
MDA-MB-468(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 脑静脉血管平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)梓醇（标准品）Catalpol质量规格：HPLC≥98%，标准品
转PYTL基因小鼠支持细胞;15P-1紫草素,左旋紫草素(标准品)Shikonin质量规格：HPLC≥98%，标准品
人小梁网细胞(HTMC)(5×105)紫草酸（标准品）Lithospermic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品
CM-M011小鼠肺大动脉内皮细胞完全培养基100mL紫丁香酚苷（标准品）Syringin质量规格：HPLC≥98%，标准品
鱼源细胞地奈德标记13C3Desonide - Labeled 13C3质量规格：美国进口
DPP4 Others Human 人 DPPIV / DPP4 / CD26 人细胞裂解液 (阳性对照) L-顺式-盐酸地尔硫卓L-cis-Diltiazem • HCl质量规格：美国进口
人卵巢表层上皮细胞HOSEpiC地尔硫卓Diltiazem质量规格：美国进口
PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 去乙酰地尔硫卓-d3Desacetyl Diltiazem-d3质量规格：美国进口
大鼠肠平滑肌细胞完全培养基 100mLO-去甲基地尔硫卓O-Desmethyl Diltiazem质量规格：美国进口
紫背金牛酸 HPLC≥98% 5mg Rat follistatin (FS) ELISA Kit 大鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒
紫丹参萜醚 HPLC≥98% 5mg Rat fractalkine (FK) ELISA Kit 大鼠趋化因子(FK)ELISA试剂盒
紫铆因 HPLC≥98% 5mg Rat galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 大鼠甘肽/甘素(GAL)ELISA试剂盒
紫杉素 B HPLC≥98% 5mg Rat Gao Min three iodothyronine (u-T3) ELISA Kit 大鼠高敏三甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒
左旋哈氏豆属酸 HPLC≥98% 5mg Rat gelsolin (Gelsolin) ELISA Kit 大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)ELISA试剂盒
左旋马尾松树脂醇 HPLC≥98% 5mg Rat glamic acid decarboxylase aoaibody (GAD-Ab) ELISA Kit 大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒
()N甲基石榴碱 HPLC≥98% 5mg Rat Glucose depende insulinoopic polypeptide (GIP) ELISA Kit 大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒
()vibo环己五醇 HPLC≥98% 5mg Rat granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒
()白花前胡甲素 HPLC≥98% 5mg Rat Granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒
()白花前胡乙素 HPLC≥98% 5mg Rat granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 大鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒
TOP10 电击感受态细胞50ul*5Rat factor related apoptosis inducing ligand (FASL) ELISA Kit 大鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒 梓木内酯 HPLC≥98% 5mg
Rat follistatin (FS) ELISA Kit 大鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒 紫背金牛酸 HPLC≥98% 5mg
Rat fractalkine (FK) ELISA Kit 大鼠趋化因子(FK)ELISA试剂盒 紫丹参萜醚 HPLC≥98% 5mg
Rat galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 大鼠甘肽/甘素(GAL)ELISA试剂盒 紫铆因 HPLC≥98% 5mg
Rat Gao Min three iodothyronine (u-T3) ELISA Kit 大鼠高敏三甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒 紫杉素 B HPLC≥98% 5mg
Rat gelsolin (Gelsolin) ELISA Kit 大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)ELISA试剂盒 左旋哈氏豆属酸 HPLC≥98% 5mg
Rat glamic acid decarboxylase aoaibody (GAD-Ab) ELISA Kit 大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒 左旋马尾松树脂醇 HPLC≥98% 5mg
Rat Glucose depende insulinoopic polypeptide (GIP) ELISA Kit 大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒 ()N甲基石榴碱 HPLC≥98% 5mg
Rat granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒 ()vibo环己五醇 HPLC≥98% 5mg
Rat Granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒 ()白花前胡甲素 HPLC≥98% 5mg
TOP10 电击感受态细胞50ul*5操作说明：
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
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文献和实验相关实验
TOP10 chemically competent cells
Overview This protocol is a variant of the Hanahan protocol [1] using CCMB80 buffer for DH10B, TOP10 and MachI strains. It builds on Example 2 of the Bloom05 patent as well. This protocol has been tested on TOP10, MachI and BL21(DE3) cells
xiaomage124 请问丁香园里的战友们，谁做过点突变？TOP10F'是不是甲基化菌株？恳请指教，多谢啦！:)有请好人帮我分析下TOP10F'菌株是否有甲基化功能，因为我要做点突变，如果这个菌株具有甲基化外源质粒DNA的功能就可以了，以下是此菌株对应的基因型，多谢啦！:) F'{lac Iq Tn10(TetR)} mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 △lacⅩ74 recA1 araΔ139Δ(ara
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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