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- 百奥莱博
- YT479-LSG
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
490
- 英文名：
N-Flag plasmid（with CMV promoter）
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1μg
特别提示：包括N端Flag标签融合蛋白质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：N端Flag标签融合蛋白质粒
英文名称：N-Flag plasmid（with CMV promoter）
产品货号：YT479
产品规格：1μg
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码Flag标签的序列，因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| Flag tag | 679-702 |
| multiple cloning site | 705-778 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 821-842 |
| SV40 polyA signal | 854-1237 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1375-1681 |
| bla promoter | 1706-1830 |
| SV40 promoter | 1850-2188 |
| neomycin/kanamycin resistance ORF | 2223-3014 |
| HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal | 3015-3473 |
| pUC origin | 3602-4269 |
本质粒的图谱如下：
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件：-20℃。
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文献和实验出来，可能两个原因，第一个是抗体不好，第二个可能是质粒没做好，发生移码了，因为你用的是pEGFP-N2载体，gfp是在n端，就算发生了移码一样可以检测到绿色萤光，仔细检查下你做的质粒看看是否正确。 liuruya 谢谢大家的回复 1.WB应该是没有技术问题，用的是GFP或flag的标签抗体，而且设置了之前做过的基因做阳性对照 2.GFP质粒测序过是完整的且没有移码，flag的是自己构建的也反复check过没有问题 觉得很妖怪 问了当时给我质粒
的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。 由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody （货号#E022060 ）可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag
【共享】在免疫沉淀IP：免疫荧光IF实验中关于Flag抗体的应用
表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。 由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody（货号#E022060）可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。比如在免疫荧光IF的实验里，同时配合EarthOx的Dylight
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