
细胞周期检测流式检测
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- 2025年07月15日
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实验原理
细胞周期(Cell Cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。
流式细胞仪PI染色法检测细胞周期的原理:由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。
客户提供的资料
1.实验细胞
2.刺激药物
实验流程
细胞培养——加药刺激——流式上机检测——结果分析
交付结果
1.流式原始数据
2.数据分析结果
3.实验报告,包括仪器,试剂及实验步骤
公司仅提供南美血清及DMEM高糖、1640、DMEM/F12等常规培养基进行细胞培养,如需用到特殊培养基或者添加细胞因子,或者更高级别血清,需要客户自行提供。
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文献和实验光染料的量也不同,通过流式细胞仪检测荧光强度,即可反映细胞周期变化情况。 此检测方法操作简便,仅需简单的固定染色即可进行检测,但很多同学做出来的结果还是不够理想。本文将带大家来看看细胞周期检测中常见的问题及解决方案: 细胞周期检测中,CV 是指 G0/G1 期峰变异系数(Coefficient of Variance,CV),是评价周期结果好坏的一个重要指标,其值越小越好。CV 值过大的异常原因及相应解决方案如下: 进行周期检测时,发现 G2/M 期缺失,首先要确定我们所检测的细胞是能够进行分裂
示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC
4. 样本的固定保存或较长时间放置可能会影响细胞表面分子和抗体之间的结合,故建议尽可能使用新鲜样品. 三、操作方法 A .小鼠淋巴组织细胞表面抗原的流式检测步骤 (一) 样品制备 1. 取出小鼠淋巴组织块,迅速浸泡在 10ml 的 Staining
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