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- 提供商:
卡梅德生物科技(天津)有限公司
- 服务名称:
细胞流式检测服务
- 规格:
/
卡梅德生物(KMD Bioscience)多年来致力于细胞生物学技术研究,基于先进的技术设备和完备的平台搭建,我们能够为客户提供完善的细胞流式检测服务。卡梅德生物拥有经验丰富的技术人员,多年从事流式细胞仪操作,积累了丰富的细胞操作技术和经验,技术成熟稳定,操作流程规范,保证结果真实可靠。此外,卡梅德生物拥有完善的设备管理的细胞培养平台,我们采用先进的流式细胞仪等多种精密仪器,结合特异性的检测试剂,能够让客户在短时间内得到满意的流式细胞仪检测报告和实验报告。卡梅德生物具有多样化的数据处理分析系统,能为客户提供从细胞处理到数据分析等一站式技术服务,还可提供售后技术咨询,解决客户问题,满足客户需求。卡梅德生物可以提供针对细胞表面抗原的流式检测服务,它是常用的流式细胞分析方法之一。荧光标记抗体孵育细胞后,利用流式细胞检测仪能够比较不同条件处理的实验组之间细胞表面蛋白的表达差异。
细胞流式检测技术(Flow cytometry, FCM)是一种快速测定单个细胞或细胞器的生物、物理和化学特性,并根据这些特性将所需要的细胞或细胞器进行定量分析和分选的技术。细胞流式检测技术是一项新型的、发展迅速的生物医学分析技术,它是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。可以用来了解细胞群的均值和分布情况,并还可以分选感兴趣的细胞、对该细胞做进一步的培养研究。它也能有效地从单细胞水平区分异质性细胞群体,检测对象包括但不限于悬浮细胞、贴壁细胞或从实体组织分离的单细胞悬液和其他生物颗粒。
卡梅德生物能够为客户提供包括悬浮细胞(例如:B细胞)、贴壁细胞或从实体组织分离的单细胞悬液、血液、各种体液和其他生物颗粒(例如:胞内细胞因子)的流式细胞检测服务,还可以提供用于单B细胞筛选技术的单B细胞分离和分选,并且可以对胞内的DNA、RNA、蛋白质及细胞表面抗原等多种参数进行分析,以解决客户难题,支持客户的项目研究。
实验原理及应用:
流式细胞检测的基本原理是将悬浮在液体中的细胞,在气体的压力下单个地通过一个细长的管道进行激光束扫描。被荧光染色的细胞经激光照射后,会产生散射光和荧光光。散射光信号分为前向角散射和侧向角散射,前向角散射反映细胞大小,而侧向角散射反映细胞内部结构,结构越复杂侧向角散射越强。荧光光则是由于细胞内的某些物质所产生的,荧光染料与特定的抗体或分子结合,使其能够与细胞表面或细胞内的特定分子结合,不同的荧光染料受到激光激发时会产生不同波长的荧光,这些荧光被转化为电信号,通过对电信号进一步分析从而确定细胞的类型、数量、状态等信息。做完流式分析后,还可以通过不同的正负电荷将指定细胞从细胞群中分离出来。
流式细胞检测的优点是可以对大量的细胞进行高通量的分析,同时可以对单个细胞进行分析,可以获得更加准确的数据。流式细胞检测可以用于细胞分析、细胞分选、细胞培养等领域,广泛应用于生物医学研究、药物研发、临床诊断等方面。
细胞流式检测服务主要实验流程:
| 实验步骤 | 周期 | ||
| 送样要求 | 细胞样本 | * 细胞达到检测所需数量(细胞周期1×106、细胞凋亡3×106),生长良好无污染,来源于人、小鼠、大鼠及其他种属(活细胞或冻存细胞) | |
| 新鲜外周血 | * 24h内采集的EDTA或肝素抗凝全血,人血5ml左右;小鼠或大鼠血1-5ml | ||
| 实验流程 | 细胞处理 | 1-2周 | |
| 荧光染色 | 1周 | ||
| 上机检测 | |||
| 交付 | 剩余样本、剩余抗体、细胞染色成像照片、详细的实验报告(包含完整的实验流程及结果分析) | ||
服务优势
- 多年抗体研发经验和细胞实验技术经验,在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性;
- 先进的细胞实验室,完备的细胞培养平台,检测效率高,短时间内即可出具流式检测报告;
- 完善的实验操作水平,完善的实验条件,严格的细胞实验控制体系,实验人员具有多年流式细胞检测技术经验,保证实验结果的有效性;
- 完备的仪器平台:拥有先进的流式细胞仪等重要仪器,检测数据更准确,灵敏度更高,上样量小,节约样本和试剂;
- 提供详细完整的实验报告,包括实验原始结果,细胞检测的实验步骤,数据分析的结果整理以及进一步分析;
- 提供从细胞培养、细胞染色到图片拍照,数据分析等一站式技术服务
公司介绍:
卡梅德生物科技(天津)有限公司作为国家高新技术企业,专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务,单、多克隆抗体开发,噬菌体文库构建与筛选服务;同时,基于我公司成熟的五大核心技术服务平台,成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。
核心平台:
---噬菌体抗体展示技术平台
卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体(M13,T7噬菌体)展示技术平台,能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体(纳米抗体/驼类纳米抗体)制备方案,包括动物免疫,文库建立,文库筛选以及重组抗体的体外表达等。
---抗体工程技术平台
卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台,多克隆抗体制备服务平台,抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台:基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台,能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体,同时基于噬菌体展示技术,我司能够制备多物种的重组单克隆抗体,包括小鼠,兔子,骆驼,羊驼以及人单抗。
多克隆抗体制备服务平台:能够为客户提供兔多抗,羊多抗,骆驼类多抗,牛多抗等多物种的抗体制备服务,根据不同的抗原类型,来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案,以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。
抗体一级序列测序平台:为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求,我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务;同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。
抗体改造技术平台:卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备,抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体,均成功交付。
---蛋白表达与纯化服务技术平台
卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台,能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。
哺乳动物表达平台: 目前公司拥有Freestyle CHO,Expi CHO,CHO-DG44,HEK293F,Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则,全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂,以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系,相比市面常用蛋白表达载体,能够为客户提供更高纯度的蛋白。
昆虫细胞表达平台:目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9,配套使用的是来自Gibco的培养基,只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台,我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白,包括多种GPCR家族成员蛋白。
原核蛋白表达平台:大肠杆菌(E.coli)重组蛋白表达技术经过多年的发展,已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达,一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备,针对每位客户的需求,我们的都会提供具体的方案设计。
酵母蛋白表达平台:毕赤酵母,酿酒酵母等蛋白表达体系,适用于需要真核表达蛋白,同时兼具产量与性价比的项目需求特点。
植物表达平台:为了提供更好的服务,卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务,项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度,高质量的植物来源的蛋白,已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。
---蛋白批量发酵平台
超高密度发酵技术:卡梅德生物科技能够为客户提供5L,10L,30L,80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务(微载体贴壁培养技术),人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml,适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵,能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台,我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。
同时,借助有氧发酵技术,我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务,采用有氧发酵类型的原核发酵技术,蛋白产量比传统的原核发酵要高(相差接近100倍蛋白产量和得率)。
---蛋白纯化技术平台:
我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪,同时拥有GE全套填料,包括Sphedax 75/200,500, G25,G100,CMFF,Q-FF,DEAE以及不同规格的预装柱等,能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业,硕士博士学历占比98%,因此有能力为客户提供快速,高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。
---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台
稳定细胞系构建平台:卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务,如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默,敲除,过表达等稳定细胞系;同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染(Lipofectin2000/3000)的稳定转染细胞系构建服务,如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。
卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆,蛋白定量,免疫印迹检测(SDS-PAGE、WB),宿主核酸检测,蛋白抗体亲和纯化,ELISA操作,内毒素检测,HPLC分析,免疫组化,IP,免疫浊度,流式细胞术等服务。
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文献和实验原代培养细胞,关键是消化,我一般酶液是新配的,要足量啊(又一次还剩三排的时候,一同学把酶液碰到水浴锅,害的我借得酶液,耽误了时间,而且组间数据紊乱,最后浪费细胞和染料,大家要注意保护好酶液啊),这样每次心理都有底,而且放入水浴37度30min,甚至扔到培养箱(不建议采用)升温。 消化前,用温PBS轻洗细胞,一次,然后开始消化,24孔板加400ul酶液(0.25%胰酶和0.02%edta,如果你的edta不好,那么配好就用0.22或0.45um膜过滤),先镜下观察,放入培养箱10
原代培养细胞,关键是消化,我一般酶液是新配的,要足量啊(又一次还剩三排的时候,一同学把酶液碰到水浴锅,害的我借得酶液,耽误了时间,而且组间数据紊乱,最后浪费细胞和染料,大家要注意保护好酶液啊),这样每次心理都有底,而且放入水浴37度30min,甚至扔到培养箱(不建议采用)升温。 消化前,用温PBS轻洗细胞,一次,然后开始消化,24孔板加400ul酶液(0.25%胰酶和0.02%edta,如果你的edta不好,那么配好就用0.22或0.45um膜过滤),先镜下观察,放入培养箱10
一、材料和试剂 1. 抗体 (1)Ratanti-mouseCXCR5-biotin(BP Pharmingen 551960) (2)Goatanti-ratIgG-biotin(BP Pharmingen 554014) (3)Straptavidin-PECy7(B PPharmingen 557598) (4)Ratanti-mouseB220-pacificblue450(eBioscience 48-0452-82)
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