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- 2025年12月29日
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- 提供商：
上海英拜
- 服务名称：
流式检测细胞凋亡
- 规格：
样
在现在的科研研究中，最初的研究基本上就是高通量筛选对照组和实验组的差异表达基因，然后进行大样本的荧光定量PCR验证，确定差异基因与某种疾病的相关性。在之后的研究中，我们就要针对差异基因进行干扰或过表达来进行细胞功能实验。其中通过流式细胞进行细胞凋亡的检测是比较重要的方法。
一、服务介绍
流式细胞术（FlowCytometry，FCM）：
流式细胞术（FlowCytometry，FCM）：
就是对在高速流动的鞘液包裹下的细胞、粒子进行分析和分选的技术，这种细胞或粒子是经过特异荧光标记的。其特点是测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个细胞，且可进行多参数测量，另一特点是在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，这就是分选技术。
重要参数：前向角散射（FSC）：前向角散射光的强度与细胞的大小有关，也就是说，同一个细胞群体，FSC强的，其细胞大一些，而FSC弱的，其细胞小一些。侧向角散射（SSC）：侧向角散射又称90°散射或大角散射。侧向角散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，对胞内较大的颗粒也会有反应。所以，侧向角散射光的强弱可反应细胞内精细结构和颗粒的性质。荧光信号（FL）：是细胞或细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。通过荧光强度可将同一个细胞群体中的有荧光标记的细胞与无荧光标记的细胞区分开来，也就是我们通常所说的阳性细胞，也可以将阳性细胞中的高FL的细胞与低FL的细胞区分开来，也就是可以把强阳性细胞和弱阳性细胞区分开来。一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、FL2、FL3。FL2-W指检测荧光的脉冲宽度，区分单个细胞和双联体细胞FL2-H指脉冲高度，细胞单位面积上的荧光浓度FL2-A指脉冲面积，即细胞荧光总和。
二、服务流程
1、细胞培养
2、药物处理
3、试剂处理
4、测定吸光度
5、撰写实验报告
三、客户提供
1、培养好的细胞（大于107）以及所需药品。
2、药物作用方式（药物浓度、时间等）。
四、交付内容
实验报告：详细操作步骤、统计分析。
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文献和实验示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
标记技术（in situ end labelling technique，ISEL）， 该技术即TUNEL法，于1993年由Wijsman等提出， 它是利用TdT将标记DUTP接到3'-OH端。研究证明，TUNEL的敏感性远高于尤其对早期凋亡的检出TUNEL更为适用。其原因可能是凋亡发生时DNA大多是双链同时断裂而单链断裂少见。ISNT是依赖DNA多聚酶I的单链修复反应，故阳性率较低。细胞凋亡时DNA断裂早于形态学改变及DNA含量减少。因此该法较前述各法具有更高的灵敏性，但环死细胞亦有DNA裂点形成。因此环死亦可呈
活性氧检测试剂盒（Reactive oxygen species assay kit）是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合
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