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- 2026年01月08日
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产品介绍
稳定细胞系在重组蛋白制备、抗体制备、药物筛选、基因功能研究及其它方面起着重要作用。稳定细胞系能持续生长，并持续稳定表达外来基因。根据研究或应用方向，可通过改变插入的拷贝数及启动子活性，调控外源基因在靶细胞的表达水平，使其升高、降低、或与靶细胞内源基因表达量相等。外源基因的插入方式可分为随机插入，或插入定点位置。
威斯腾生物现为广大研究者提供稳定细胞系构建服务，使用先进技术水平，为您提供高质量的稳定细胞系。构建服务可使用复能基因提供的 CHO、HEK293、Hela、NIH3T3等工具细胞，也可使用客户指定的特定细胞系。从克隆构建、细胞系建立、基因扩增、单克隆筛选、细胞系鉴定、到功能研究，全方位的实验选择可满足研究者对蛋白表达、基因沉默等多种科研需求。
选择威斯腾生物的哺乳动物稳定细胞系构建服务，您可以：
1）自由选择基因插入方式
2）自由选择克隆载体
3）自由选择靶细胞系
4）自由选择扩增基因或调整蛋白表达量
基因敲除技术一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯腾生物利用CRISPR/Cas系统可以有效的实现对细胞系特定基因的敲除。
我们利用该技术，定点敲除各种细胞系中的特定基因。对打靶细胞进行药物筛选，利用CRISPR/Cas系统获得的基因敲除细胞的剔除效率会明显高于常规的利用RNAi和shRNA介导的基因敲落。
技术特色
1. 可实现多个靶基因位点及多个基因的同时敲除
2. Nickase酶/双gRNA技术，显著降低脱靶率
3. 无种属限制，适用于各种细胞系的靶向敲除
操作流程
靶向目标序列sgRNA的设计及载体构建
目标细胞系共转染
阳性细胞株的筛选和鉴定
参考细胞系
肿瘤细胞系： BEL-7402人肝癌细胞 CNE人鼻咽癌细胞 Hela人宫颈癌细胞 MCF-7人乳腺癌细胞等
神经细胞系：SK-N-SH人神经母瘤细胞
卵巢细胞系：SK-OV-3人卵巢癌细胞
血管平滑肌细胞系：VSMC血管平滑肌
成纤维细胞系：包皮成纤维细胞，心肌成纤维细胞
肺细胞系：SK-MES-1人肺鳞癌细胞 NCI-H460人大细胞肺癌细胞 A549人非小细胞肺癌细胞
肾细胞系：NRK肾小球足细胞
巨噬细胞：MH-S小鼠肺泡巨噬细胞 RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 THP-1人单核巨噬细胞
内皮细胞：HUVEC人脐静脉内皮细胞
......
具体CRISPR /Cas9细胞建系技术定制服务，欢迎联系我们。
威斯腾实验服务流程
威斯腾生物服务项目
| 分子生物学检测 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒包装 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 生长因子芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| 炎症因子芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趋化因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 基因编辑动物 | |
| 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 | |
| 膜片钳实验 | ||
| 细胞生物学检测 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理检测 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研设计指导&文章评估/润色 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 论文翻译润色服务 |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 旷场实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 分子药理研究平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 生物膜片钳药物筛选平台 | 抗炎免疫药物药效学评价 | |
| 常规药物体外筛选 |
【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！
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文献和实验【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol
基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9 筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol 上海南方模式生物研究中心 技术顾问 周效华 从2011年科学家实现TALEN技术，2013年科学家实现CRISPR/Cas9技术，这些技术的迅速成熟都给基础生物学研究、临床医学研究提供了更为方便和快捷的分子生物学工具。技术进步必将在未来给科学研究及基因治疗研究带来更为广泛的发力！这在2014年以来的频频出现的Cas9技术在各个领域的应用进展中可以清晰看到。欢迎感兴趣的朋友联系我交流
篇相关文献相继发表发表 (图 A)，这项技术如同病毒一般广泛又迅速的传播到世界各地，并且随着时间推移，这项技术也出现了许多革新与优化。 CRISPR 序列的生物学功能依然不够明确 1987 年，科学家们首次在大肠杆菌中发现了 CRISPR 基因，并且随后在 40% 的细菌中和 90% 的古细菌体内发现了类似序列。2005 年，CRISPR 序列与抗噬菌体的免疫作用联系起来。整个 CRISPR-Cas9 获得性免疫系统通路大致分为三个步骤：获得 CRISPR 序列-产生
靶序列并进行 DNA 的裂解。CRISPR 的实际应用CRISPR 系统作为一种精确的基因编辑技术，主要被应用在 DNA 编辑领域，可为疾病的靶向个性化治疗提供强大的技术支持。例如，可在待敲除的目的基因的上下游各设计一条向导 RNA（gpRNA1、gpRNA2），将其与含有 Cas9 蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中。则向导 RNA 可通过碱基互补配对靶向 PAM 附近的目标序列，Cas9 蛋白会使基因上下游的 DNA 断裂。而后细胞自身存在的 DNA 损伤修复的应答机制可使 dsDNA 断裂
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