F-TOP10化学感受态细胞北京品牌

特别提示：包括F-TOP10化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：F-TOP10化学感受态细胞
英文名称：F-TOP10 Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0024
产品规格：20×100μl/100×100μl

TOP10菌株来源于MC1061，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B 高度类似(DH10B为galE15型，而TOP10为galU型)。TOP10生长速度快，37℃，10小时可见克隆。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。F-TOP10感受态细胞经特殊工艺制作，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内完成转化、
涂板操作，pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(Strr)endA1 nupG
快速转化操作方法(10min)：
1.提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2.F-TOP10感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
3.用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的2YT或LB培养基上。
4.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13 h。
快速热激转化操作方法(25min,可提高转化效率)：
1.F-TOP10感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟(晃动会降低转化效率)。加入700 μl不含抗生素的LB，37℃，200 rpm复苏10分钟，涂板(均匀，表面无水渍)。
3.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
注意事项：
1.F-TOP10 快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作：F-TOP10感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5分钟后，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置20钟。42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中静置2分钟。加入700 μl LB，37℃，200 rpm复苏30分钟，涂板。
2.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时应轻柔操作。
3.F-TOP10 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转化操作，增加孵育步骤。

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