可视化LAMP扩增试剂盒北京现货

特别提示：包括可视化LAMP扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：可视化LAMP扩增试剂盒
英文名称：Colorimetric LAMP Kit
产品货号：BTN180601
产品规格：50次

本试剂盒将LAMP可见光染料和Bst DNA聚合酶整合到2×LAMP MagicMix中，减少了加样操作，能降低操作误差。肉眼检测，不需要任何仪器即可肉眼判断是否有扩增。使用改良的温热启动Bst DNA聚合酶，该酶只有在40℃以上时才有活性，反应特异性更强。改良的酶既可用于DNA为模板的LAMP扩增，也可用RNA模板的RT-LAMP扩增。本试剂盒具有较高的扩增效率更高，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA分子。

试剂盒组成：

组分	规格
2×LAMP MagicMix	500μL
LAMP阳性对照模板-引物混合物	45μL
超纯水	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1．制备DNA或RNA样品：用合适的DNA或RNA提取试剂盒提取样品DNA或RNA。
2．配制自备的5×LAMP引物混合液。
  先加超纯水（不要用TE）将各引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物和超纯水，zuì后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积大于或小于1mL，则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放置2年。

引物名称	母液浓度	加入量	在混合液中浓度
FIP引物	100μM	80μL	8μM
BIP引物	100μM	80μL	8μM
F3引物	100μM	10μL	1μM
B3引物	100μM	10μL	1μM
Loop F	100μM	20μL	2μM
Loop B	100μM	20μL	2μM
超纯水		780μL

3．在新的反应管中设置LAMP反应（PC为阳性对照、NC1为不加模板阴性对照、NC2为不加引物阴性对照。
  注意：为便于可视化颜色比较，每次实验必须设置至少一个阴性对照。本试剂盒只提供LAMP的阳性对照模板，不提供RT-LAMP的阳性对照模板）：

加入物	样品管	PC	NC1	NC2
2×LAMP MagicMix	10μL	10μL	10μL	10μL
5×LAMP引物混合液(自备)	4μL	-	4μL	-
模板DNA或RNA(自备)	1-100ng	-	-	1-100ng
LAMP阳性对照模板-引物混合物	-	4.5μL	-	-
超纯水	补水至20μL

4．混匀，此时反应液呈现非常淡的蓝色。置于60-65℃保温60-120分钟（具体zuì佳温度跟用户设计的LAMP引物序列相关，一般选择63℃。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖30uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。
  注意：如果不使用Loop引物，则zuì好保温2小时。
5．80℃，10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
6．观察实验结果。将反应管放置在白色背景前观察，观察反应液颜色。阳性对照（PC）将呈现淡蓝色，无模板和无引物阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（左边为阴性，右边为阳性）：

7．如果结果不明确，则需要电泳确认：取扩增产物5μL跟loading buffer混合后上样，出现LAMP特征性电泳图谱则表示有扩增。由于电泳需要打开反应管的盖子，非常容易污染实验环境，所以LAMP电泳区域必须跟反应设置区域分开。
8．结果分析：如果阳性对照能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。

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