SuperLimit ECL化学发光液

增强化学发光法(ECL)

Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。 2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。 5）显影、定影。 6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）-底物化学发光 ECL 法

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。实验方法原理———底物化学发光 ECL 法Western 免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与 Southern 或 Northern 杂交

WB 实验背景很脏是什么原因？该如何解决？

过夜具体多长时间算合适，其实没有硬性规定；   二抗孵育的时间不宜过长，一般是室温下摇床孵育 1~2 小时，抗体孵育完成后要清洗干净，特别是二抗孵育完成后，否则可能导致显影结果出现高背景。   6、发光液配置   大部分实验室使用的 ECL 发光液，A 液和 B 液按照 1：1 的比例配置；   发光液要求现用现配，每次根据使用量合理配置用液量；   发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好，背景脏或者漆黑一片。