SUPERCULTURE 胰酶-EDTA消化液

Annexin V 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒实验操作指南

易造成细胞膜损伤而出现细胞坏死的假阳性，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-荧光素的结合从而干扰对于细胞凋亡的检测。同时，胰酶细胞消化液中应尽量不含EDTA，因为EDTA可能会影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。 加入步骤1中收集的细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻悬浮细胞并计数。 注意：加入细胞培养液非常重要，一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清

细胞消化后成团分散不开的问题

，然后在CO2孵箱中37度多消化一段时间，然后再吹打均匀，可能会有一定的效果，这样对细胞也有保护作用，但是时间最好不要超过30分钟，浓度大约在0.15％左右，我过去消化贴壁的心肌细胞，来测量细胞体积，就是用的这种方法，感觉效果还可以。丁香园网友zxcong的问题为：我细胞在传代消化后很容易成团，而且吹打也没有什么特别作用，这是什么原因呢？该如何去防止呢？丁香园网友bingxue324的观点为：消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象，血清可以终止胰酶的作用，如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶

wish细胞的传代

wish细胞是上皮细胞， 人羊膜细胞 ，培养基我用的是最常见的1640（10％小牛血清，加双抗）。1、细胞长满培养瓶时既要传代。我用胰酶和edta的混合液消化。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的终浓度是0.02%。2、使用前37度预热，每个25ml培养瓶加9滴的胰酶和edta混合液，消化液的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶和edta混合液以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，5分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消