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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
423
- 英文名:
Blood Direct PCR Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻融
- 规格:
50μl×40次|50μl×200次
特别提示:包括血液直接PCR扩增试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:血液直接PCR扩增试剂盒
英文名称:Blood Direct PCR Kit
产品货号:WE0120
产品规格:50μl×40次|50μl×200次
本试剂盒是由热启动酶、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+以及PCR稳定剂和增强剂等组成的预混体系,本产品使用简便,无需事先提纯可直接用血液为模板扩增目的基因,可有效扩增高GC含量的模板和引物。
试剂盒组成:
| 组份 | 50μl×40次 | 50μl×200次 |
| 2×Blood Direct PCR Mix | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意事项:建议使用时添加≤10%的全血为模板,加上血液后用涡旋器将管中各组分轻轻混匀。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 20μl反应体系 |
| 2×Blood Direct PCR Mix | 25μl | 10μl |
| Forward Primer,10μM | 1μl | 0.4μl |
| Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.4μl |
| Template Blood | 0.5-5μl | 0.25-2μl |
| ddH2O | up to 50μl | up to 20μl |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 35-40个循环 |
| 退火 | 55-60℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30-60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品中所含热启动酶的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
我公司销售的血液直接PCR扩增试剂盒现货供应,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验【求助】土壤微生物总DNA的提取及细菌16S rDNA的PCR扩增出问题了,寻求大家的帮助!
tyuanc 我用MO Bio的soil DNA Isolation Kit提取土壤总DNA,提取的DNA直接跑胶,看不见任何条带,采用细菌16S rDNA通用引物(27F和1492R)进行PCR扩增,也没有结果,有一次我将试剂盒提取的DNA50倍稀释后,进行细菌16S rDNA的PCR扩增,扩增出了目的条带,我所用的酶为Takara的LA Taq,用普通的Taq酶扩增不出来,但隔了一周后再去重复,什么条件都一样,却再也扩不出来了,我重新提取了新的DNA进行
及KRAS 问题:1、这批标本PCR后跑琼脂糖凝胶电泳,根本没有条带,不知是pcr扩增失败,还是因为我们样本原因,DNA太少,不能成功。 2、标本已经没办法改变了,不管是否因为石蜡包埋年代久远还是样本量太少,不知各位战友有没有好办法,提DNA,目前我已尝试的办法有:QIAamp试剂盒,传统酚氯仿抽提,蛋白酶直接裂解煮沸法,磁珠法提DNA,均不能成功 3、目前基因检测金标准还是测序,但是鉴于我们的情况,对于AMOS或者HRM,或者是广州益善公司的液相
的PCRMIX,是目前最“傻瓜”的 PCR 反应体系之一,不论是质粒、菌液、CDNA、基因组 DNA、或者是直接裂解的粗提物,GC 含量高达 75% 的模板,都能轻松扩增,不需要费力的“摸条件”! 本产品包含酶、dNTP、特殊稳定剂和优化的反应缓冲液,浓度为 2x。DNA 扩增时,只需加入模板,引物和水,使 MasterMix 溶液的浓度为 1× 即可进行反应。具有快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。进行 PCR 扩增可以减少操作时间,避免因多步操作带来的污染,特别适宜高通量筛选基因的扩增
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