大家都在搜
手机验证
大量
Plant Tissue PCR Kit(With Dye)
有效期1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
4℃保存
50T/200T
规格: | 50T | 产品价格: | ¥393.0 |
---|---|---|---|
规格: | 200T | 产品价格: | ¥1353.0 |
类别 | 组分编号 | 组分名称 | 10187ES05 | 10187ES50 | 10187ES70 |
Part I | 10187-A | Buffer P1 | 250 μL | 1.25 mL × 2 | 5 mL × 2 |
10187-B | Buffer P2 | 50 μL | 500 μL | 1 mL × 2 | |
Part II | 10187-C | 2 × Plant Master Mix* | 50 μL | 500 μL | 1 mL × 2 |
组分 | 体积(μL) | 体积(μL) | 终浓度 |
2× Plant Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
裂解产物(DNA模板) | 1 | 2 | - |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
循环步骤 | 温度 (°C) | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94 | 5 min | 1 |
变性 | 94 | 10 sec | 35 |
退火 | 50-65 | 20 sec | |
延伸 | 72 | 1 min/kb | |
终延伸 | 72 | 5 min | 1 |
表2 反应条件 |
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。 | |
引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱 | 裂解液、中和液加入比例不当,裂解混合液影响PCR体系的pH值。 | 正常条件下,中和后的裂解混合液的pH应该在7-8左右(裂解产物和Buffer P2严格按照5:1的量进行中和)。 |
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存5天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
模板加入量不适合。 | 在反应体系<5%范围内优化模板加入量。 | |
PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数,推荐35-40循环为佳。因模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 | PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的NACLO溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。 |
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
需要更多技术资料 索取更多技术资料