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- 文献和实验
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- 库存:
246
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
冷藏
- 规格:
2万U/10万U
特别提示:包括T4 DNA连接酶(400U/μL)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:T4 DNA连接酶(400U/μL)
产品货号:CZ036
产品规格:2万U/10万U
产品简介:
T4 DNA连接酶在辅助因子ATP的作用下,可催化双链DNA或RNA上的5’-磷酸末端和3’-羟基末端之间形成磷酸二酯键,可用于催化平末端或黏性末端之间的连接反应,也可修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。在DNA片段与载体、Linker或Adaptor DNA的连接中具有广泛应用。
编号 组份 20000 U 100000 U 储存条件 保质期
① 10×T4 DNA Ligase Buffer 100 μL 500 μL -20℃ 2年
② T4 DNA Ligase 50 μL 250 μL
单位定义:
在20 μL 1×T4 DNA连接酶反应缓冲液中,6 μg λDNA/Hind III的酶切产物在16℃下反应30分钟,50%的DNA片段被连接所需的酶量定义为1个活性单位。
失活或抑制:
65℃加热10分钟可使T4 DNA连接酶失活。
产品特点:
高纯度,确保该产品具有zuì高的活性和纯度,无核酸酶、外切酶、RNA酶、外源DNA/RNA等污染。
操作说明:
1.在冰浴条件下,将下列反应液加入无菌、无核酸酶微量离心管中:
a.10×T4 DNA连接缓冲液需于室温下解冻后混匀。
b.插入DNA的加入量需为载体DNA的3倍摩尔量。
c.T4 DNA连接酶需zuì后加入反应体系中。
2.使用移液器轻柔吹打均匀后,短速离心;
3.对于黏性末端,可于16℃孵育过夜或室温孵育10分钟;对于平末端或单碱基突出片段,则可于16℃孵育过夜或室温孵育2小时;
4.置于65℃加热10分钟,使酶失活;
5.冰浴冷却后,取1~5 μL反应液转化至50 μL感受态细胞中。
我公司销售的T4 DNA连接酶(400U/μL)报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶,可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合,该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
连接酶,反应10分钟。平滑末端连接:在20µl反应体系中加入1µl T4 DNA 连接酶反应2小时,或者加入1µl高浓度T4 DNA 连接酶反应10分钟。 另外,NEB的快速连接试剂盒 (Quick Ligation Kit, NEB #M2200V [15个反应])是独有的可以在室温5分钟条件下连接平滑末端和粘性末端的试剂盒。 图1:在25°C条件下,用1 unit(1:400稀释后取1 µl)T4 DNA连接酶连接λDNA/Hind Ⅲ片段(4-碱基粘端)不同反应时间的结果。 图
噬菌体T4DNA连接酶分子也是一条多肽链,分子量为60KD,其活性很容易被0.2mol/L的KCl和精胺所抑制。此酶的催化过程需要ATP辅助。T4DNA连接酶可连接DNA-DNA,DNA-RNA,RNA-RNA和双链DNA粘性末端或平头末端。另外,NH4C1可以提高在大肠杆菌DNA连接酶的的催化速率,而对T4DNA连接酶则无效。无论是T4DNA连接酶,还是大肠杆菌DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。 DNA连接酶 - DNA连接酶种类 T4DNA连接酶
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