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安必奇生物
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植物DNA-free基因编辑
北京安必奇生物可提供多种植物DNA-free基因组编辑方法,可帮您创造更安全的植物转基因产品。这些技术包括瞬时表达CRISPR/Cas9质粒DNA(transiently expressed CRISPR/Cas9 plasmids DNA,TECCDNA)、体外转录CRISPR/Cas9 (in vitro transcripts,IVTs)以及由纯化好的Cas9蛋白和sgRNAs组成的预组装核糖核酸复合物(ribonucleoprotein, RNPs)。这些技术可以避免外源DNA与基因组的整合,并可以减少脱靶效应。此外,与传统的技术相比,这些技术可避免用杂交或回交来分离CRISPR/Cas9嵌合体,因此更便宜、实验周期更短。
图 1. 瞬时CRISPR/Cas9 DNA 编辑技术(Zhang et al., 2016)。
图 2. DNA-free植物CRISPR/Cas9 RNAs体外转录和RNP技术(Yin et al., 2017)。
我们可提供许多方法将TECCDNA、IVTs和RNPs 转入植物细胞,主要有聚乙二醇(PEG)、阳离子脂质和/或电穿孔介导的原生质体转化和基因枪介导的未成熟胚转化(图1和2)。已经成功地将该技术运用到拟南芥、烟草、生菜、水稻和小麦等物种。我们拥有专业的专家,可以为客户提供从TECCDNA、IVTs和RNPs的制备到突变筛选的一站式服务。如需进一步的信息,请随时与我们的工作人员联系。
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文献和实验Cell:填补重要空白!新型基因编辑工具诞生,开启线粒体 DNA 编辑新时代
酶链式反应,即体外特异性地大量扩增核酸序列的 PCR 技术。 上述三大了不起的发现均荣膺诺贝奖,随着科学技术车轮缓缓向前,基因编辑技术在此基础上应运而生! 自 20 世纪 90 年代以来,一系列基因编辑工具,如锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应蛋白核酸酶(TALEN)、CRISPR 系统及单碱基编辑技术等基因编辑技术,被用以对基因组进行定点修饰。其中 CRISPR 系统及单碱基编辑技术更是在基因组编辑领域掀起了一场真正的革命! 然而,这些基因编辑工具在面对线粒体 DNA 的编辑时,却显得
1. 液氮研磨1g左右的植物组织,转移到离心管中。改用研磨枪在冰上研磨,不加β-巯基乙醇 研磨时可加入适量的PVP、β-巯基乙醇。若CTAB准备2-3天内用完,则可将PVP、β-巯基乙醇直接加入其中。 2. 加入500µl的2*CTAB (60℃或65℃预热) ,颠倒混合均匀后在60℃或65℃水浴30m-1h小时,其间要上下颠倒混匀数次。 3.取出离心管,加入
,加入适量的灭菌ddH2 O或TE溶解DNA。9 电泳检测完整性。三、结果分析 1. 用紫外分光光度计在230nm、260nm、 280nm和310nm波长分别读数。其中260nm用琼脂糖凝胶电泳(0.8%)检测核DNA的完整性(见图2 )。 完整性好的基因组DNA应是一条比23Kb滞后的电泳带, 若降解则成为弥散状。 电泳前缘为未除干净的RNA。 2.如果DNA沉淀呈白色透明状而且溶解后成粘稠状,说明DNA含有较多的多糖类物质,可以在取材前将植物放暗处24hr,以达到去除淀粉的目的
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