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- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海
- 10183ES50
- 2026年01月28日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃保存，避免反复冻融。
- 保质期：
有效期1年
- 英文名：
Plant Tissue Direct PCR Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
50T
| 产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
| Plant Tissue Direct PCR Kit |
10183ES50 |
50 T |
353.00 |
| Plant Tissue Direct PCR Kit |
10183ES70 |
200 T |
1213.00 |
产品描述
本试剂盒中提供的2× Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。
该试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。
产品组分
| 类别 | 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | 储存 | |
| 10183ES503（50 T） | 10183ES70（200 T） | ||||
| Part I | 10183-A | Buffer P1 | 3 mL | 10 mL | 室温或4℃ |
| 10183-B | Buffer P2 | 3 mL | 10 mL | 4℃ | |
| 10183-C | 6× DNA Loading Buffera | 1.5 mL | 1.5 mL | 4℃或-20℃ | |
| Part II | 10183-D | 2× Plant Master Mixb | 500 μL | 1 mL×2 | -20℃ |
b）2× Plant Master Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。
运输方法
冰袋运输。
保存方法
1. 试剂10183-A【Buffer P1】，在常温干燥条件下，可保存12个月，如需保存更长时间可置于4℃。低温保存，易出现沉淀，可平衡至室温或37℃水浴10 min，待沉淀溶解后，混匀使用。
2. 试剂10183-B【Buffer P2】，中和裂解产物，使其不影响后续 PCR 反应。保存条件与Buffer P1一样。
3. 试剂10183-C【6× DNA Loading Buffer】，可置于4℃或-20℃长期保存。
4. 试剂10183-D【2× Plant Master Mix】，-20℃保存，避免反复冻融。如果环境温度过高，2× Plant Master Mix 可能会变浑浊，可置于冰上放置1-2 min，待溶液澄清，上下颠倒混匀3-5次后再使用。
操作方法
本试剂盒根据不同实验需求提供了两种操作方法。直接法仅需要将一小片植物组织加入PCR反应体系即可；裂解法则是将少量含有植物组织的裂解产物加入PCR反应体系。其中，裂解法适合目的片段较长，扩增难度较大，以及需要对同一样本进行多次PCR扩增的实验。
裂解法
1. 取3-5 mg叶片（直径5-7 mm）组织，置于200 μL或1.5 mL离心管中。
【注】：切勿加入过量叶片组织，以便酶解反应更顺利进行。
2. 在离心管中加入50 μL Buffer P1，确保裂解液能够完全浸没叶片组织。
3. 盖好离心管盖，95℃处理10 min。
【注】：加热后，若管壁上液体较多，可进行短暂瞬时离心。
4. 加入50 μL Buffer P2，用微量移液器吹打或者涡旋混匀。
5. 所得裂解液可4℃保存（5天）或-20℃长期保存或直接用于PCR扩增。
直接法
1. 在200 μL离心管中加入相应的2× Plant Master Mix，再添加对应的引物，并用ddH2O使其稀释1×（PCR体系配置见下表）
2. 剪取1-2 mg叶片碎块（直径2-3 mm）加入配置好的1×PCR反应体系。
【注】：确保叶片碎块完全被PCR反应液浸没，切勿加入过量组织叶片。
3. 根据优化好的PCR条件（退火温度等）进行PCR反应。
4. 琼脂糖凝胶电泳检测结果。
【注】：建议使用试剂盒提供的6× DNA Loading Buffer，切勿使用含有SDS的Loading Buffer进行电泳。
PCR反应鉴定——PCR反应体系
| 组分 | 体积（μL） | 体积（μL） | 终浓度 |
| 2× Plant Master Mix | 10 | 25 | 1× |
| Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
| 裂解产物（DNA模板） | 4 | 10 | - |
| ddH2O | To 20 | To 50 | - |
a）模板使用量：建议10-20%总体系。避免超过总体系的30%。
b）引物终浓度：0.2-0.25 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。
c）反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
e）对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
PCR反应鉴定——PCR反应条件
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
b）延伸时间：需要根据片段的长度来确定，对于1 kb以内的DNA片段，建议延长时间为30 sec。
注意事项
1. 本试剂盒只适合于多糖多酚含量低的植物叶片样本，如小麦、水稻、烟草、玉米、大豆、油菜等。不适合多糖多酚含量高的植物样本。
2. 建议使用新鲜采取的叶片组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。叶片组织以幼嫩为宜，若为成熟的叶片，避免使用叶片主脉部位组织。
3. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
常见问题与解决方法
| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 | |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
| 阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 | 叶片中多糖多酚含量较高，裂解混合液呈棕黄色甚至棕红色。 | 本试剂盒不适合多分多糖含量较高的样品。 |
| 裂解液、中和液加入比例不当，裂解混合液影响PCR体系的pH值。 | 正常条件下，中和后的裂解混合液的 pH 应该在7-8左右(裂解产物和Buffer P2严格按照1:1的量进行中和)。 | |
| 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存5天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
| 模板加入量不适合。 | 在反应体系5-20%范围内优化模板加入量。 | |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数，推荐35-40循环为佳。因模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
| 非特异性扩增 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
| 阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
| 样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的NACLO溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
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文献和实验实验步骤 1. Protocol for grinding plant seeds. 1) grind using a bead mill a. place one seed into each well of a 2 ml square well block. b. Pipette nuclease-free water
for 60 minutes. 5) Add 100 μl FP3 Buffer and vortex to mix. 6) Store the extraction at 2-8°C. 2. PCR Protocol This protocol serves as a guideline for PCR amplification. Optimal reaction conditions, such as incubation times
of tissue/ cell harvest. Dynabeads® mRNA DIRECT™ Kit protocols can be scaled up or down to suit specific sample source and quantity. Please see section "Sample Guidelines and Scaling" before preparing the sample, and for recommended bead and buffer volumes
