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-20℃保存,避免反复冻融。
有效期1年
Plant Tissue Direct PCR Kit
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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50T
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
Plant Tissue Direct PCR Kit |
10183ES50 |
50 T |
353.00 |
Plant Tissue Direct PCR Kit |
10183ES70 |
200 T |
1213.00 |
类别 | 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | 储存 | |
10183ES503(50 T) | 10183ES70(200 T) | ||||
Part I | 10183-A | Buffer P1 | 3 mL | 10 mL | 室温或4℃ |
10183-B | Buffer P2 | 3 mL | 10 mL | 4℃ | |
10183-C | 6× DNA Loading Buffera | 1.5 mL | 1.5 mL | 4℃或-20℃ | |
Part II | 10183-D | 2× Plant Master Mixb | 500 μL | 1 mL×2 | -20℃ |
组分 | 体积(μL) | 体积(μL) | 终浓度 |
2× Plant Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
裂解产物(DNA模板) | 4 | 10 | - |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。 | |
引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。 | 叶片中多糖多酚含量较高,裂解混合液呈棕黄色甚至棕红色。 | 本试剂盒不适合多分多糖含量较高的样品。 |
裂解液、中和液加入比例不当,裂解混合液影响PCR体系的pH值。 | 正常条件下,中和后的裂解混合液的 pH 应该在7-8左右(裂解产物和Buffer P2严格按照1:1的量进行中和)。 | |
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存5天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
模板加入量不适合。 | 在反应体系5-20%范围内优化模板加入量。 | |
PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数,推荐35-40循环为佳。因模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 | PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的NACLO溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。 |
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