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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃保存
- 保质期:
有效期1年
- 英文名:
Hieff Long Taq DNA Polymeras
- 库存:
大量
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格:
125U
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
| Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶 | 10107ES62 | 125 U | 155.00 |
| Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶 | 10107ES78 | 5×125 U | 735.00 |
产品描述
Hieff® Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性的蛋白组成的混合酶,其保真性是Taq DNA Polymerase的6倍,专门用于长片段的扩增。独特的缓冲体系使Hieff® Long Taq DNA Polymerase可扩增长达8 kb的人基因组片段和10 kb左右的质粒模板。PCR扩增产物的3’端带A,可直接用于TA克隆。试剂盒中的PCR Enhancer有助于高GC含量片段的扩增。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
| 10107ES62(125 U) | 10107ES78(5×125 U) | ||
| 10107-A | Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 25 μL | 25 μL×5 |
| 10107-B | 10× Hieff® Long Taq Buffer(Mg2+ free) | 500 μL | 500 μL×5 |
| 10107-C | 25 mM MgCl2 | 1 mL | 1 mL×5 |
| 10107-D | dNTP Mix (10 mM each) | 100 μL | 100 μL×5 |
| 10107-E | 5 × PCR Enhancer | 125 μL | 125 μL×5 |
| 10107-F | 10 × Loading buffer | 1.25 mL | 1.25 mL×5 |
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃, 30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA -HindIII,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20º℃保存,有效期1年。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
PCR反应体系(推荐冰上配制)
| 组分 | 体积 |
| ddH2O | to 50 μL |
| 10× Hieff® Long Taq Buffer(Mg2+ free) | 5 μL |
| 25 mM MgCl2 | 3-4 μL |
| dNTP Mix (10 mM each) | 1 μL |
| 5 × PCR Enhancer | 适量 |
| DNA模板 | 适量 |
| Primer正向 (10 μM) | 2 μL |
| Primer反向 (10 μM) | 2 μL |
| Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.5 μL |
2)聚合酶浓度:酶量可在0.25-1 μL之间调整。通常情况下加大酶量可以提高扩增产量,但有可能会使特异性下降。
3)Mg2+终浓度:对于大多数由本酶催化的PCR反应来说,Mg2+的浓度为2 mM;如有特殊需要,可在终浓度1.5-2.5 mM区间内调整Mg2+浓度。
4)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系)
| 模板种类 | 用量 |
| 动植物基因组DNA | 10-200 ng |
| 大肠杆菌基因组DNA | 1-100 ng |
| λDNA、质粒DNA | 0.1-10 ng |
PCR扩增程序
1)目的片段<5 kb
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30 sec | 30-35 |
| 退火 | 55℃ | 30 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 7 min | 1 |
2)目的片段>5 kb
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 1-3 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-35 |
| 退火/延伸 | 68℃ | 30-60 sec/kb | |
| 终延伸 | 68℃ | 7 min | 1 |
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文献和实验PCR(Polymerase Chain Reaction) 即聚合酶链式反应,对于常年狂奔在实验室的实验狗来说并不陌生。那么,对于 PCR 反应的核心成份,DNA 聚合酶,你选对了吗? 常见的 DNA 聚合酶如 Taq、Phanta、Pfu、KOD、Primerstar、Klenow、Bst、Phi29 等等。根据耐热性来分可分为耐热酶和常温酶。耐热聚合酶如 Taq、Pfu、KOD、Primerstar 等,常温聚合酶包括 Klenow、Bst、Phi29 等。根据保真度来分,高保真聚合
Long-Range PCR with a DNA Polymerase Fusion
Proofreading DNA polymerase fusions offer several advantages for long-range PCR, including faster run times and higher fidelity compared with Taq -based enzymes. However, their use so far has been limited to amplification of small
Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌,能在70~75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的. (一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷 酸,70℃延伸率大于60个核苷酸/秒,55℃时











