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长片段DNA聚合酶 Hieff Long Taq DNA P

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  • 上海翌圣
  • 10107ES62
  • 2026年01月16日
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    • 英文名

      Hieff Long Taq DNA Polymeras

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      大量

    • 供应商

      翌圣生物科技(上海)股份有限公司

    • 规格

      125U

    产品信息
    产品名称 产品编号 规格 价格(元)
    Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶 10107ES62 125 U 155.00
    Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶 10107ES78 5×125 U 735.00

    产品描述
    Hieff® Long Taq DNA PolymeraseTaq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性的蛋白组成的混合酶,其保真性是Taq DNA Polymerase6倍,专门用于长片段的扩增。独特的缓冲体系使Hieff® Long Taq DNA Polymerase可扩增长达8 kb的人基因组片段和10 kb左右的质粒模板。PCR扩增产物的3’端带A,可直接用于TA克隆。试剂盒中的PCR Enhancer有助于高GC含量片段的扩增。

    产品组分
    产品细节图片1
    编号 组分 产品编号/规格
    10107ES62125 U 10107ES785×125 U
    10107-A Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) 25 μL 25 μL×5
    10107-B 10× Hieff® Long Taq BufferMg2+ free 500 μL 500 μL×5
    10107-C 25 mM MgCl2 1 mL 1 mL×5
    10107-D dNTP Mix (10 mM each) 100 μL 100 μL×5
    10107-E 5 × PCR Enhancer 125 μL 125 μL×5
    10107-F 10 × Loading buffer 1.25 mL 1.25 mL×5

    活性定义
    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃, 30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。

    质量控制
    核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA -HindIII37℃下孵育4 hDNA的电泳谱带无变化。
    核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA37℃温育4 hDNA的电泳谱带无变化。
    大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。

    运输与保存方法
    冰袋运输。-20º℃保存,有效期1年。

    注意事项
    为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

     

    PCR反应体系(推荐冰上配制)
    组分 体积
    ddH2O to 50 μL
    10× Hieff® Long Taq BufferMg2+ free 5 μL
    25 mM MgCl2 3-4 μL
    dNTP Mix (10 mM each) 1 μL
    5 × PCR Enhancer 适量
    DNA模板  适量
    Primer正向 (10 μM) 2 μL
    Primer反向 (10 μM) 2 μL
    Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) 0.5 μL
     1PCR Enhancer推荐仅当扩增片段GC%> 60%且优化条件也无法正常扩增时用;可能会使保真度有轻微降低。
    2聚合酶浓度:酶量可在0.25-1 μL之间调整。通常情况下加大酶量可以提高扩增产量,但有可能会使特异性下降。
    3Mg2+终浓度对于大多数由本酶催化的PCR反应来说,Mg2+的浓度为2 mM;如有特殊需要,可在终浓度1.5-2.5 mM区间内调整Mg2+浓度。
    4不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系)
    模板种类 用量
    动植物基因组DNA 10-200 ng
    大肠杆菌基因组DNA 1-100 ng
    λDNA、质粒DNA 0.1-10 ng

    PCR扩增程序
    1)目的片段<5 kb
    循环步骤 温度 时间 循环数
    预变性 94℃ 5 min 1
    变性 94℃ 30 sec 30-35
    退火 55℃ 30 sec
    延伸 72℃ 30 sec/kb
    终延伸 72℃ 7 min 1
    :退火温度需要根据引物退火温度调整,一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。
    2)目的片段>5 kb
    循环步骤 温度 时间 循环数
    预变性 94℃ 1-3 min 1
    变性 94℃ 10 sec 30-35
    退火/延伸 68℃ 30-60 sec/kb
    终延伸 68℃ 7 min 1
    :对于> 5 kb的片段,推荐使用长引物, Tm值在68-70℃,把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性。延长延伸时间有助于提高扩增产量。
     

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