CollagenaseⅡ 胶原酶Ⅱ

胶原蛋白酶 来源于溶组织梭菌

胶原酶Ⅱ可以用 TESCA buffer （50 mM TES，0.36 mM 氯化钙，pH 7.4，37°C）配制成 1-2 mg/ml。 也可以用含钙镁的 PBS、含钙镁的 hanks 或不含血清的培养基配制。配完后分装，避免反复冻融。
1 个胶原消化单位（CDU）：在 pH 7.4，37℃以及钙离子存在的条件下，以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。 1FALGPA 单位：在 pH 7.5、25℃以及钙离子存在的条件下，一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0µmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。
胶原酶Ⅱ为粗品，用于分离脂肪细胞，也可以用于分离各种组织、肿瘤，尤其是上皮组织。外 观为黑棕色粉末。分子量68,000到125,000，最适PH为6.3-8.8。胶原酶能够特异性结合 -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸（X）和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的 混合酶。主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶， 组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共同作用。

激活剂：Ca2+，每摩尔酶需要4g钙离子激活。

底物：不同类型的胶原是其天然底物，而一些合成的多肽也可以作为其底物，比如： N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 类胶原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎动物 胶原酶的底物。

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相关文献：
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