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- Solarbio
- 北京
- BC0515
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Mitochondrial complex I/NADH-CoQ reductase Activity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC0515-100T/96S
- 规格：
100管/96样
线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-CoQ还原酶活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0515
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液一 | 液体75 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 提取液二 | 液体22 mL×1瓶 | -20℃保存 |
| 试剂一 | 液体20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×2支 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
| 试剂四 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
- 试剂二：临用前取一支加入1 mL丙 酮，充分溶解，2-8℃可保存1个月（1瓶粉剂即可做100T，为延长试剂盒使用时间，故此产品多给一支）；
- 试剂三：临用前加入0.1mL 丙 酮，丙 酮易挥发，使用完毕后注意封口，-20℃可保存2个月；
- 试剂三工作液：临用前根据用量将试剂三：丙 酮=5μL：0.5mL（约50T）混合备用，现用现配；
- 试剂四：临用前取一支加入1.6mL蒸馏水（约100T），充分溶解，-20℃可保存1个月，避免反复冻融（1瓶粉剂即可做100T，为延长试剂盒使用时间，故此产品多给一支）；
- 工作液的配制：根据用量将丙 酮：试剂二：试剂三工作液=250μL：250μL：500μL（约50T）混合备用，现配现用。
复合体Ⅰ（EC 1.6.5.3）又称NADH-CoQ还原酶或NADH脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ，同时可使O2还原生成O2-，是呼吸电子传递链上产生O2-的主要部位。测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。
复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+，在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、丙 酮、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：
- 为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（A1高于1.5），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4，需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数）；若ΔA偏小，则可以通过增加加入的样本体积来提高灵敏度。
- 样本蛋白浓度需自行测定。由于提取液一中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量（约0.5mg/mL）。
- 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活。另附按样本计算公式和按细胞数量计算公式
- 附：使用样本重量计算公式：（样本检测数为100T/48S）
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
复合体I活性（U/g质量）= [ΔA1×V反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V样)÷T=3215.43×ΔA1÷W
B、沉淀中复合体I活力的计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
复合体I活性（U/g质量）= [ΔA2×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V重悬×V样)÷T=1286.17×ΔA2÷W
ΔA1：上清测定值；ΔA2：沉淀测定值；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V提取：加入提取液一体积，1mL；V重悬：沉淀重悬体积（0.2mL提取液一+0.2mL提取液二），0.4mL；V样：加入样本体积，0.01mL；T：反应时间，1min；W：样本质量，g；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
C、样本复合体I总活力的计算：
样本复合体I总活力即为上清中复合体I活力与沉淀中复合体I活力之和。
按样本质量计算：复合体I（U/g 质量）=3215.43×ΔA1÷W+1286.17×ΔA2÷W
D、以96孔板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可。
- 附：使用细胞数量计算公式：（样本检测数为100T/48S）
- 上清中复合体I活力的计算：
复合体I活性（U/106 cell）= [ΔA1×V反总÷（ε×d）×109]÷(N÷V提取×V样)÷T =3215.43×ΔA1÷N
- 沉淀中复合体I活力的计算:
复合体I活性（U/106 cell）= [ΔA2×V 反总÷（ε×d）×109]÷(N÷V重悬×V样)÷T=1286.17×ΔA2÷W
ΔA1：上清测定值；ΔA2：沉淀测定值；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V提取：加入提取液一体积，1mL；V重悬取：沉淀重悬体积（0.2mL提取液一+0.2mL提取液二），0.4mL；V样：加入样本体积，0.01mL；T：反应时间，1min；N：细胞数量，以106计；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
- 样本复合体I总活力的计算：
复合体I总活性（U/106 cell）=3215.43×ΔA1÷N +1286.17×ΔA2÷N
D、以96孔板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可。
相关发表文献：
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- Gadicherla A K, Stowe D F, Antholine W E, et al. Damage to mitochondrial complex I during cardiac ischemia reperfusion injury is reduced indirectly by anti-anginal drug ranolazine[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics, 2012, 1817(3): 419-429.
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文献和实验该产品被引用文献
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| AuthorJiawei Mei, Dongdong Xu, Lingtian Wang, Lingtong Kong, Quan Liu, Qianming Li, Xianzuo Zhang, Zheng Su, Xianli Hu, Wanbo Zhu, Ming Ye, Jiaxing Wang, Chen Zhu | Publish_toADVANCED MATERIALS |
| IF29.4000 | PMID37262064 |
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文献支持
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