- ￥2850
- Solarbio
- 北京
- BC0945
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Mitochondrial Complex IV / Cytochrome C Oxidase Activity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC0945-100T/96S
- 规格：
100管/96样
线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C氧化酶活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0945
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体75 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体33mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×2瓶 | -20℃保存 |
| 试剂三 | 粉剂×2支 | 2-8℃保存 |
- 试剂二：试剂放于试剂瓶内玻璃瓶中。临用前取1支加入13.5mL试剂一溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；
- 试剂三：试剂置于试剂瓶内EP管中；临用前取1支加入2mL试剂一溶解，用不完的试剂-20℃保存2周，避免反复冻融；
- 工作液的配制：临用前取0.5mL试剂三加入到溶解好的4.5mL试剂二中混合备用（约25T），或者按比例现用现配。
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧生成水。还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：
- 为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于1），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4，需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数），使A1-A2小于0.2，可提高检测灵敏度；若ΔA偏小，则可以通过增加加入的样本体积来提高灵敏度。
- 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量（单独测量）。
- 本试剂盒试剂足够完成50管反应
- 附：使用样本重量计算公式：（检测样本数为100T/48S）
单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/g 质量)=[ΔA上清×V反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V样)÷T=1099×ΔA上清÷W
ΔA上清：上清测定值；V反总：反应体系总体积，2.1×10-4L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V提取：加入提取液体积，1.0mL；W：样本重量，g；T：反应时间，1min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
B、沉淀中复合体Ⅳ活力的计算：
单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/g 质量)=[ΔA沉淀×V反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V样)÷T=440×ΔA沉淀÷W
ΔA沉淀：沉淀测定值；V反总：反应体系总体积，2.1×10-4L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V提取：加入提取液体积，0.4mL。W：样本重量，g。T：反应时间，1min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
C、样本复合体Ⅳ总活力的计算：
样本复合体Ⅳ总活力即为上清中复合体Ⅳ活力与沉淀中复合体Ⅳ活力之和。
按样本质量计算：复合体Ⅳ（U/g 质量）=1099×ΔA上清÷W+440×ΔA沉淀÷W
D、按96孔板计算：
将上述计算公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可。
实验实例：
- 取0.1g兔肝脏进行样本处理，按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿ΔA2=A1空白管-A2空白管=0.7713-0.7669=0.0044，上清液的ΔA1=A1测定管-A2测定管=0.7985-0.7754=0.0231，ΔA上清=ΔA1-ΔA2=0.0231-0.0044=0.0187，沉淀中的ΔA1=A1测定管-A2测定管=0.8843-0.7415=0.1428，ΔA沉淀=ΔA1-ΔA2=0.1428-0..0044=0.1384，按样本质量计算：
沉淀中复合体Ⅳ活力(U/g 质量)=440×ΔA沉淀÷W=440×0.1384÷0.1 =608.96 U/g 质量
则样本复合体Ⅳ总活力（U/g 质量）=1099×ΔA上清÷W+440×ΔA沉淀÷W
=1099×0.0187÷0.1+440×0.1384÷0.1=814.473 U/g 质量。
相关发表文献：
- Qiuli OuYang,Nengguo Tao,Miaoling Zhang. A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum. Frontier in Immunology. February 2018;(IF4.259)
- Huazhang Zhu,Weizhen Zhang,Yingying Zhao,et al. GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions. Molecular Neurodegeneration. November 2018;(IF8.274)
- Wang M, Zhang Y, Xu M, et al. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2019, 134: 229-238.
- Bao Z, Xu X, Chao H, et al. ERK/Nrf2/HO-1 pathway-mediated mitophagy alleviates traumatic brain injury-induced intestinal mucosa damage and epithelial barrier dysfunction[J]. 2017.
- Li N, Qin S, Xie L, et al. Elevated Serum Potassium Concentration Alleviates Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury via Mitochondrial Preservation[J]. Cellular Physiology and Biochemistry, 2018, 48(4): 1664-1674.
- Willis J H, Capaldi R A, Huigsloot M, et al. Isolated deficiencies of OXPHOS complexes I and IV are identified accurately and quickly by simple enzyme activity immunocapture assays[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics, 2009, 1787(5): 533-538.
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文献和实验| AuthorFeng Wang, Qinghe Wu, Guoping Jia, Lingchi Kong, Rongtai Zuo, Kai Feng, Mengfei Hou, Yimin Chai, Jia Xu, Chunfu Zhang, Qinglin Kang | Publish_toAdvanced Science |
| IF15.1000 | PMID37698584 |
指在生物体氧化还原中，参与电子传递的一系列氧化还原酶系，通常系指通过线粒体等的分子态氧氧化 NADH以及琥珀酸等的酶系。其电子传递顺序如下： O3 ←细胞色素（ a a3 ）复合体←细胞色素 c ←细胞色素 c1 但该顺序也表示每个前面物质的还原型将其后面物质的氧化型还原，这样反复进行，最终将分子态氧氧化成水。在呼吸链中有非血红素铁和铜原子等参与。在细胞内呼吸链系存在于线粒体的内膜上，各阶段的酶及因素可与不溶
Nature 重磅：林圣彩院士团队七年攻坚！首次破解「神药」二甲双胍作用靶点之谜
）处于中心位置，其同时也作为机体代谢稳态的主要调控因子。目前，二甲双胍通过抑制线粒体电子传递链的复合物 I 而激活 AMPK 已被广泛接受。然而，在他们的研究中却发现能量水平的下降只存在小鼠服用高剂量二甲双胍的个体，也就是说，低剂量的二甲双胍不会引起线粒体呼吸链复合体 I 的抑制以及 AMP/ATP 比值的升高。 因此，有必要深入探讨临床相关剂量的二甲双胍是如何激活 AMPK 的。通过一系列的生化实验和观察，他们发现临床剂量的二甲双胍能充分抑制溶酶体的空泡 H+-ATPase（v-ATPase
广义的细胞色素 c是含有血红素 c的细胞色素之总称。通常是指主要存在于高等动植物、酵母、霉菌等线粒体中的细胞色素 c，起着传递电子的作用。为分子量约 1.3万的碱性蛋白质，还原型的吸收带为 550、 520、 415毫微米，氧化型为 407毫微米。α 因此很早便被研究，并获得结晶。不仅一级结构而且立体结构也已清楚（图 1）。其结构基本上是生物界共有的。由细胞色素 c氧化酶〔细胞色素（ a＋ a3 ）复合体〕氧化。在呼吸链中从细胞色素 c开始接受电子，各种还原酶都已清楚
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