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- 文献和实验
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100
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/
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/
- 保质期:
1年
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/96样
中文名称:线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶测试盒(微量法)
货号:YLK0111
测试方法:微量法
产品规格:100管/96样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
复合体Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶,广泛存在于动物、植物、 微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从 NADH 传递给 CoQ,同时可使 O2还原生成 O 2.-,是呼吸电子传递链上产生 O 2.-的主要部位。 测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS) 生成状态。
测定原理
复合体Ⅰ能够催化 NADH 脱氢生成 NAD+,在 340nm 下测定 NADH 的氧化速率计算出该酶 活性的大小。
本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:液体 20mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 1.5mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂四:液体 25mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂五:液体 1mL×1 支,-20℃保存;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 2mL 蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存, 禁止反复冻融。
工作液的配制:临用前将试剂五转移到试剂四中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保 存,禁止反复冻融。
样本的前处理: 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
① 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆 器或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g,4℃离心 5min。
③ 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。
④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ(此步可选 做)。
⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴, 功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10 秒,重复 30 次),用于复合体Ⅰ酶活性测定。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)工作液于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min。
(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、200μL 工作液和 15μL 试剂六,混 匀,记录 340nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。


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| 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶测试盒 | 紫外分光光度法 |
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文献和实验指在生物体氧化还原中,参与电子传递的一系列氧化还原酶系,通常系指通过线粒体等的分子态氧氧化 NADH以及琥珀酸等的酶系。其电子传递顺序如下: O3 ←细胞色素( a a3 )复合体←细胞色素 c ←细胞色素 c1 但该顺序也表示每个前面物质的还原型将其后面物质的氧化型还原,这样反复进行,最终将分子态氧氧化成水。在呼吸链中有非血红素铁和铜原子等参与。在细胞内呼吸链系存在于线粒体的内膜上,各阶段的酶及因素可与不溶
可逆性ATP酶,能在外能驱动下逆浓差转运H 。线粒体内膜呼吸链中有三个酶复合体具有质子泵功能,能将H 由内腔转运到外腔,它们是:细胞色素c氧化酶、辅酶QH2 - 细胞色素c还原酶、NADH- 辅酶Q还原酶。细菌的的质膜上普遍有质子泵,有的伴有呼吸链组分。嗜盐菌膜上的菌紫质(bacteriorhodopsin)受光照驱动,可将H 运入菌体内浓集。
复合物I又称NADH 脱氢酶(NADH dehydrogenase)或NADH-CoQ 还原酶复合物, 功能是催化一对电子从NADH传递给CoQ,它是线粒体内膜中最大的蛋白复合物,是跨膜蛋白,也是呼吸链中了解最少的复合物。哺乳动物的复合物Ⅰ含有42种不同的亚基,总相对分子质量差不多有1000kDa。其中有7个亚基都是疏水的跨膜蛋白,由线粒体基因编码。复合物Ⅰ含有黄素蛋白(FMN)和至少6个铁硫中心(iron-sulfur centers)。一对电子从复合物Ⅰ传递时伴随着4个质子被传递到膜
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