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- 文献和实验
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230
- 英文名:
T7 RNA Polymerase
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
1000U
特别提示:包括T7 RNA聚合酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:T7 RNA聚合酶
英文名称:T7 RNA Polymerase
产品货号:YT409
产品规格:1000U
本酶来源于由大肠杆菌表达,表达基因为嗜菌体T7 RNA Polymerase基因,是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5"→3"RNA聚合酶。T7 RNA Polymerase可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入,合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。
特点:T7 RNA Polymerase可以识别修饰的NTP,例如生物素标记、dì高辛标记、荧光素标记的NTP,可以用于各种标记RNA的合成。同时对于T7启动子有高度的特异性。
用途:用于RNA合成,合成的RNA可以用于或用作:杂交探针,基因组DNA序列分析,核糖核酸酶保护测定(RNase protection assay),反义RNA合成,作为体外翻译的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用,核酸扩增分析,siRNA、miRNA等小RNA。
活性定义: 37℃60分钟内,催化1 nmol AMP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),6mM MgCl2,10mM DTT,2mM spermidine,0.5mM NTP,0.6MBq/ml[3H]-ATP,20μg/ml plasmid DNA containing the specific T7 RNA Polymerase promoter sequence。
纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
酶储存溶液:50mM Tris-HCl(pH8.0),150mM NaCl,5mM DTT,0.1mg/ml BSA,0.5mM Elugent,50% glycerol。
Transcription Buffer(5X):200mM Tris-HCl(pH7.9 at 25℃),30mM MgCl2,50mM DTT,50mM NaCl,10mM spermidine。
失活或抑制:70℃加热10分钟可使T7 RNA Polymerase失活。加入适量EDTA也可以使T7 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制T7 RNA Polymerase的活性。
储存条件:-20℃
我公司销售的T7 RNA聚合酶质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验一般是指 DNA依存性 RNA聚合酶。是催化以 DNA为模板( template)、三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成 RNA的酶。因为在细胞内与基因 DNA的遗传信息转录为 RNA有关,所以也称转录酶。反应以下式示: n1 -n4 表示各个模板的 DNA链的胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘧啶、腺嘌呤的碱基数。通过特异的碱基配对的形成,合成具有与模板 DNA链完全互补的碱基排列的 RNA。反应是由( 1) DNA与酶的结合
,则可计算其直径约为100A,即约为双链DNA的30bp节段的长度。然而全酶可结合约60个核苷酸 ,提示其形状应为椭圆球形。 结构 为什么细菌 的RNA聚合酶需要这么大和复杂的分子结构呢?而某些噬菌体特有的RNA聚合酶则要小得多,仅由一条多肽链组成。这证明RNA合成所需的机构可以远比宿主的酶小。这种情况说明,噬菌体内的转录仅需一条"最小"的机构。然而这种酶只能识别噬菌体本身所有的少数几个启动子;它们不能识别其他启动子。例如噬菌体T3和T7的RNA聚合酶分子很相似
合成是以DNA的一条链为模板而进行的,所以这种转录方式又叫做不对称转录。②都以四种三磷酸核苷的底物,原料;③都遵循DNA与RNA之间的碱基配对原由,A=U,T=A,C=G,合成与模板DNA序列互补的RNA链。④RNA链的延长方向是5’→3’的连续合成。⑤需要Mg2+或Mn2+离子。⑥并不需要引物。RNA聚合酶缺乏3’→5’外切酶活性,所以没有校正功能。 RNA聚合酶催化下列反应: 大肠杆菌RNA聚合酶的研究得比较透彻的,这是一个分子量达50多万,全酶由五咱亚基组成,去掉δ
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