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T7 RNA Polymerase
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嵘崴达
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−20°C
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1000 units
T7 RNA 聚合酶
T7 RNA Polymerase
from Escherichia coli BL 21/pAR 1219
General description
T7 RNA 聚合酶通常用于转录DNA,这些 DNA 已经克隆到具有两个相反方向的噬菌体启动子的载体中。可以使用不同的聚合酶,从插入 DNA 的任一链,选择性地合成 RNA。使用该系统可以产生同源标记的单链 RNA。转录物可以用生物素或 DIG-11-UTP 进行非放射性标记,或用 [α-32P] 或 [α-35S] 标记的核苷酸放射性标记至高比活性。
杂交探针的合成:T7 RNA 聚合酶能高效生产均一标记的 RNA。该标记的 RNA 可用作 Southern、Northern 和斑点印迹中的杂交探针,以及原位杂交。
合适的标记:转录物可以用生物素-16-UTP 或 DIG-11-UTP 进行非放射性标记。它们也可以用 [α-32P]- 或 [α-35S] 标记的核苷酸放射性标记为高比活性。
Specificity
启动子特异性
T7 RNA 聚合酶具有极高的启动子特异性,仅转录噬菌体 T7 DNA 或克隆到T7 启动子下游的 DNA。尽管 T7 和 T3 启动子序列仅相差 3bp,但 T7 RNA 聚合酶仅转录克隆到其启动子下游的DNA。
热灭火:通过加入 2 μl 0.2MEDTA(pH8.0)和/或加热至 65℃ 来终止反应。
Application
• T7 RNA 聚合酶可以转录来自 T7 启动子下游的克隆 DNA 模板的 RNA。可以用标记的 NTP 进行合成以产生高度标记的 RNA。 合成的 RNA 有多种应用,包括:RNA 或 DNA 印迹技术
• 原位杂交
• RNA 酶保护研究:由酶合成的转录物可用作 RNA 剪接和加工研究的前体 RNA。
• 通过在转录反应期间加入 m7GpppG 或 m7GpppA 超过 GTP 或 ATP,以在体外合成加帽的 RNA。可以将产生的反义 RNA 引入细胞中,以抑制相应基因的表达。
• 微阵列靶标合成
包装
1个试剂盒包含2个组分
| 10881767001 | RNA Polymerase, T7, 1000 UT7 RNA聚合酶 | 1,000 U |
| 11031163001 | RNA Polymerase, T3, 1000 U RNA聚合酶T3 | 1,000 U |
| 11214667001 | Anti-Digoxigenin, Fab Fragment | 1 mg |
| 11449460001 | DNA MW-Marker IX | 50 µg (1 A260 unit) |
| 10711454001 | BSA, 20mg, SQ for Molecular Bi | 20 mg (1 ml) |
| 4898133001 | rAPid Alkaline Phosphatase 100碱性磷酸酶 | 1,000 reactions |
| 11759779001 | BM Chem-Lum. ELISA Substr. (AP | 150 ml |
| 10909831001 | Restr.-Endonucl. Nsi I, 200 u | 200 U (10 U/µl) |
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文献和实验一般是指 DNA依存性 RNA聚合酶。是催化以 DNA为模板( template)、三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成 RNA的酶。因为在细胞内与基因 DNA的遗传信息转录为 RNA有关,所以也称转录酶。反应以下式示: n1 -n4 表示各个模板的 DNA链的胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘧啶、腺嘌呤的碱基数。通过特异的碱基配对的形成,合成具有与模板 DNA链完全互补的碱基排列的 RNA。反应是由( 1) DNA与酶的结合
,则可计算其直径约为100A,即约为双链DNA的30bp节段的长度。然而全酶可结合约60个核苷酸 ,提示其形状应为椭圆球形。 结构 为什么细菌 的RNA聚合酶需要这么大和复杂的分子结构呢?而某些噬菌体特有的RNA聚合酶则要小得多,仅由一条多肽链组成。这证明RNA合成所需的机构可以远比宿主的酶小。这种情况说明,噬菌体内的转录仅需一条"最小"的机构。然而这种酶只能识别噬菌体本身所有的少数几个启动子;它们不能识别其他启动子。例如噬菌体T3和T7的RNA聚合酶分子很相似
mRNA Amplification with T7 RNA Polymerase
on a 42ºC oven and set PCR machine to hold at 70ºC. In an Eppendorf tube add: 1 µg Total RNA 1 µL T7 oligo(dT) primer q.s. to 12 µL with Nuclease-free H2 O Incubate 10 min. at 70ºC. Spin briefly to pull
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