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- 百奥莱博
- SY0284-OLN
- 北京
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
118
- 英文名：
Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
20T
特别提示：包括零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)
英文名称：Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit
产品货号：SY0284
产品规格：20T
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：
1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；
3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4）可连接长达10kb目的产物；
5）本产品不含多克隆酶切位点（MCS），使用者在引入后续酶切位点进行酶切操作时，不会受到MCS位点的影响，从而增加酶切效率以及克隆成功率。
产品用途：平端PCR产物的克隆。克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。
产品组份：
pESI-Blunt simple vector (30ng/µl)————20µl
1kb control insert (40ng/µl)————5µl
10×Enhancer——————20µl
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。
除了零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点),，我公司还供应以下相关产品：
名称：单细胞裂解液(DNA提取)
货号：BTN130803
规格：1mL
本产品为单细胞DNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定。纯化所得DNA可用于全基因组扩增(WGA)等实验。本产品足够使用200次以上。
储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。
名称：单细胞悬浮液
货号：BTN130805
规格：1mL
本产品是单细胞悬浮溶液，本产品与后续各种单细胞分析实验、单细胞扩增实验兼容。
储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。
名称：胚胎裂解液
货号：BTN130806
规格：1mL
本产品是胚胎培养过程中分离单个胚胎细胞的裂解液。可用于分离得到不同时期的胚胎的单细胞，得到的单细胞可用于各种单细胞分析，核酸提取等实验。
储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。
名称：大肠杆菌BL21(DE3)pLysS化学感受态细胞
货号：BTN90507
规格：0.1mL*10
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)plysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。该菌株带有质粒plysS，具有氯霉素抗性，此质粒含有表达T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG 诱导的表达。本感受态细胞具有氯霉素抗性，适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
菌株基因型为：F- ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)pLysS Camr
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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文献和实验Blunt PCR克隆乃利用传统T4连接酶方法，但载体和Topo平端的一样，含ccdB基因，所以同样可降低菌落背景，易于筛选。 表10 PCR克隆试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method Product
PCR Cloning Kit）（Topo XL PCR Cloning Kit） 因为越来越多高确限度热稳定酶如Pfx、Pfu被用于PCR 扩增，使到PCR 后都只是平端产物。这种平端克隆 往往效率低，并且有非特异性背景菌落产生，造成筛选困难。 Topo平端克隆 主要改良载体设计，把ccdB （Control of cell death）基因并入到mcs中，如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达
本领。 经典分子克隆技术vs无缝组装克隆技术 技术总是随着时间向前发展的，由难到易，化繁为简，将不能变为可能。分子克隆技术的发展完美体现了这一点。 以构建表达载体为例，经典分子克隆中，要将目标片段插入载体，全靠内切酶的拆分和连接酶的拼接。关键是选择合适的酶切位点，使得酶切“拆”得的目标片段末端和相应载体末端正好能互补“拼”在一起，连接酶才能连起来。选择酶时首先不能破坏目标基因完整性（包含从起始密码到终止密码）及载体完整性；其次，尽量避免选两个酶切生成粘端一样的（粘端互补）——两边粘端一样的载体“偏爱
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