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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
1年
- 英文名:
Zero pTOPO Cloning Kit(TA end,Simple)
- 库存:
999
- 供应商:
百生跃
- 规格:
20T/100T
| 规格: | 20T | 产品价格: | ¥660 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100T | 产品价格: | ¥2805 |
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文献和实验: 1、找到载体全序列 ,查找有没有你想要加的位点(Primer premier5……一堆软件 ,再不济了用word),如果没找到你想加、减、换的位点,恭喜了,革命要成功了; 2、方法上不太推荐点突变或其他以overlap PCR 为基础的技术,推荐小片段 克隆 ,也就是做shRNA 载体的那种方法,人工合成(按引物 合成)你想要的MCS序列的正反链,两端加上载体上两个切点的粘末端序列,人工退火(95度10min,然后每分钟降5度直至Tm值下5度,维持10min,即可),不用电泳检验,直接
近年来随着生物技术的不断发展,出现了许多克隆新基因的方法和手段,如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法,以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。(相关阅读:精华vol 687
基因连接到载体上,需经过一系列酶促反应,涉及几种工具酶,其中最为重要的是两大类酶: ① 限制性内切酶:把载体DNA切开形成平端或粘末端。 ② DNA连接酶:用于连接载体和外源DNA片段。 pUC18/19是常用的质粒载体,其图谱如右所示: pUC18/19的多克隆位点如下所示: 三、实验仪器 离心机移液器16套(每2人1套)
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