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- 详细信息
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- 技术资料
- 英文名：
Minute™ Mitochondria Isolation Kit for Muscle Tissues/Cultured Muscle Cells
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50 Preps
MinuteTM 肌肉组织及细胞线粒体提取试剂盒
目录号：MM-038
描述
肌肉细胞内拥有大量的线粒体是因为肌肉细胞不断被用来驱动身体，另一种富含线粒体的器官是心脏，线粒体约占心脏细胞的40％。然而，从肌肉组织中分离线粒体并非易事，因为纤维间线粒体隐藏在肌肉纤维的深处。传统方法通常需要使用电动组织匀浆机，并使用超高速离心机，利用高密度介质（如Percoll梯度）进行纯化。本试剂盒利用了新一代离心管柱技术，可以从肌肉样品中快速，简单的分离线粒体，且易操作。从新鲜/冷冻肌肉组织中分离完整的线粒体仅需约1小时，产率高。
试剂盒组分(50T):
1. 缓冲液 A 25ml
2. 缓冲液 B 10ml
3. 离心管柱 50 个
4. 收集管 50 个
5. 研磨棒 2 个
6. 组织研磨粉 5g
重要产品信息:
1.仔细阅读整个说明书。使用前完全解冻缓冲液 A 和缓冲液 B，冰上预冷离心管柱和收集管。
2.离心机请调整成RCF/ Xg模式，按照离心力设置离心机，所有离心步骤应在4℃室温下或冷冻离心机中进行。
3.如果研究蛋白质磷酸化，应在使用前将磷酸酶抑制剂加入缓冲液 A 中，同时建议加入蛋白酶抑制剂。（请按照蛋白酶或磷酸酶抑制剂母液比例，例如母液是 100x，添加时按照 1：100 添加，1ml 缓冲液 A 添加 10ul抑制剂）
4.建议使用 BCA 蛋白质分析试剂盒测定蛋白质浓度。
5.塑料棒是可重复使用的，用水清洗并用纸巾擦干即可。
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文献和实验1.Li, S., Dong, S., Xu, Q., Shi, B., Li, L., Zhang, W., ... & Zhong, M. (2022). Sleeve Gastrectomy-Induced AMPK Activation Attenuates Diabetic Cardiomyopathy by Maintaining Mitochondrial Homeostasis via NR4A1 Suppression in Rats. Frontiers in Physiology, 422.
2.Peng, L., Li, L., Fan, H., Lin, F., Liang, X., Zhu, Y., ... & Sachinidis, A. (2023). Unmusking of Protein Phosphatase 2 Regulatory Subunit B as a crucial factor in the development and progression of dilated cardiomyopathy.
3.Radajewska, A., Szyller, J., Krzywonos-Zawadzka, A., Olejnik, A., Sawicki, G., & Bil-Lula, I. (2023). Mitoquinone Alleviates Donation after Cardiac Death Kidney Injury during Hypothermic Machine Perfusion in Rat Model. International Journal of Molecular Sciences, 24(19), 14772.
4.Seo, Y. K., Yoo, Y., Yeon, M., Kim, W. K., Shin, H. B., Lee, S. M., ... & Ro, H. (2023). Age-dependent loss of Crls1 causes myopathy and skeletal muscle regeneration failure.
5.Lin, F., Liang, X., Meng, Y., Zhu, Y., Li, C., Zhou, X., ... & Peng, L. (2024). Unmasking Protein Phosphatase 2A Regulatory Subunit B as a Crucial Factor in the Progression of Dilated Cardiomyopathy. Biomedicines, 12(8), 1887.
Sample Protopcol for Two-Step Carbodiimide Coupling of Protein to MagPlex™ Magnetic Carboxylated Microspheres Microspheres should be protected from prolonged exposure to light throughout this procedure. 1.Resuspend
ZOOM® IPGRunner™系统：简化的双向电泳（2D gel eletrophoresis）
Runner™夹盒放置在实验台，有覆盖膜窗口的一面朝上。包括2M Thiourea, 7 M urea, 0.5% ZOOM® Carrier ampholytes (Invitrogen, Cat. no. ZM0022), 2.0% CHAPS, 20 mM DTT 的再水化缓冲液（155μl）和E. coli裂解物被加入到IPG Runner™夹盒窗口。胶条的酸性（+）末端插入狭槽，胶面朝向夹盒的膜或覆盖面。用密封带（包含在试剂盒中）封闭加样孔，提供隔绝的再水化环境。胶条在室温下再水化8-16小时
干燥。以上三种方法的共同问题是操作繁琐，产量低。 C. 离心管柱提取法： 这种方法利用了一种新的蛋白质提取技术，脂肪组织通过无表面活性剂的缓冲液匀浆，水油乳状液通过简单的冷冻后，离心使其通过特殊的离心管柱（有孔径，表面性质被处理过的）提取。离心管柱的作用是快速，干净的从油相中分离出水相蛋白。Invent Biotechnologies Inc 公司利用专利技术生产的这种脂肪蛋白提取试剂盒可以从脂肪组织中提取全部的总蛋白，产量远远高于其他方法。 推荐产品：Minute™ Total
