realtimePCR技术服务

realtimePCR实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该方法做到了真正意义上的DNA定量，较以往常用的终点定量的方法更加准确。特点：该技术不仅实现了对DNA模板的定量而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点 。服务项目：1.绝对定量：检测起始模板数的精确拷贝数，通常用到标准曲线。2.相对定量：基因表达的研究一般采用相对定量，相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的管家基因，如：GAPDH、β-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。您只需提供您的组织或细胞样本，我们会为您提供全套real time PCR技术服务，全部实验皆为进口试剂，所用定量PCR仪器为进口ABI7700或7900。主要实验步骤：1． 根据基因序列设计特异性引物；2． 客户样品RNA抽提；3． RNA质量检测；4． 逆转录为CDNA；5． 制备标准曲线；6． Real time PCR扩增；7． 实验数据分析。服务须知：1.您可自备引物，亦可委托我们设计合成（费用由客户承担）。自备引物必须是PAGE纯化的高质量的干粉，我们不接受已溶解的引物。内参及SYBR Green染料我公司提供。2.样本要求：尽可能新鲜。3.样本量：组织样本，质量≥150mg；细胞样本，细胞数≥1×107。4.我公司不接受您提供的RNA样品，除非您有足够的证据证明所提供的RNA没有问题。5.报告送达：实验结果将以电子或书面形式提交给您。样本制备及注意事项:1. 悬浮细胞： 悬浮细胞培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。加入1ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，将细胞沉淀（1×107个细胞）放入-70℃ 冰箱保存。干冰运输。也可以在细胞沉淀中加入1ml的 Trizol裂解液反复吸打几次，目视可见细胞层溶解完全后，-70℃保存效果更佳。2. 贴壁细胞：取大约1×107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入 1 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70℃冰箱保存。干冰运输。也可以在细胞沉淀中加入1ml的 Trizol裂解液反复吸打几次，目视可见细胞层溶解完全后，-70℃保存效果更佳。3. 组织：采集新鲜组织（注意：生物体死亡后1分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或-70℃冰箱中保存，干冰运输。也可每 50-100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品。匀浆的裂解液4℃ 短期保存（1个月）。-20℃或-70℃长期保存。特别提醒：1.因RNA易出现降解，建议将标本加Trizol后运输。 2.实验所需要的取材工具以及组织存放器皿等必须经过无菌无酶高温灭菌处理。 3.取材实验环境要求无RNA酶污染。