DNA Ladder(100～1500bp)

特别提示：包括DNA Ladder(100～1500bp)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DNA Ladder(100～1500bp)
英文名称：DNA Marker(100～1500bp)
产品货号：QN2132
产品规格：50T|100T

本DNA Ladder是由单独制备的PCR产物混合而成，共有11条DNA片段，已加入上样缓冲液，可以直接电泳，每次上样5μl。为便于电泳后观察，特异性加强500bp条带，其浓度约为100ng/5μl，其它条带的DNA浓度约为50ng/5μl。参考片段(bp)：100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500。

储存条件：-20℃

除了DNA Ladder(100～1500bp)，我公司还供应以下相关产品：



名称：一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装
货号：BTN70606
规格：30次
尿素-聚*烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离200nt以下的小片段RNA，尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1.一站式，含有电泳所需要的所有试剂，即开即用，十分方便，免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活，可以根据需要配制各种浓度的Urea-PAGE，以便对长度各异的RNA进行电泳。
3.电泳后可直接用于UV观察、银染、胶回收、Northern杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液，可以防止甘油的干扰。

产品组成：

成分	规格
尿素	210g
*烯酰胺	60g
甲叉双*烯酰胺	3g
TBE电泳液，10×	250ml
TEMED	1.5ml
过硫酸*(干粉)	1g
miRNAload	10ml
miRNA Marker	30次
固相RNase清除剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存(miRNAload、miRNA Marker需要-20℃保存)。保存期为一年。

使用方法：

一、准备工作
1. 用固相RNase清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制1 X电泳缓冲液：将适量的10X电泳缓冲液用RNase-free水稀释10倍，得到1X电泳缓冲液待用。
3. 配制10%过硫酸*溶液：精确称取约100mg过硫酸*到一干净的1.5mL离心管中，按每1mg过硫酸*加10μl RNase-free水的比例加入RNase-free水，摇晃致溶，立即使用。注意：放置时间不要超过一周。

二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液，配制一块36cm×45cm×0.8 mm的胶需要120mL凝胶溶液。
2. 根据所需要的凝胶溶液的体积，在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分(此处以配制100mL浓度为15%的凝胶为例):

成分	终浓度	用量
尿素	7M	42g
40% Acrylamide/Bis溶液	15%	37.5mL
10×电泳缓冲液	1×	10ml
补RNase-free水到100mL

注：Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)。
 

需分离的RNA长度范围	Acrylamide/Bis工作浓度
6-100nt	20%
25-150nt	15%
40-200nt	12%
60-400nt	8%
80-500nt	5%
1000-2000nt	3.5%

3. 搅拌并加热到40-50℃左右，直到尿素完全溶解。
4. 冷却到室温后，将三角瓶接上真空系统抽真空处理10-15分钟以充分去除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限，此步也可以省略。
5. 边摇晃溶液变加入50μl TEMED和500μl 10%过硫酸*。注意：即使选择其他工作浓度的Acrylamide/Bis，TEMED和10%过硫酸*的用量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化，TEMED和10%过硫酸*的用量也要按比例改变。
6. 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳。
7.室温放置30-60分钟使胶凝固。
8. 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×电泳缓冲液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
9. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。

三、电泳
1.在上样前，预电泳 20-30分钟以使多余的过硫酸*跑出加样空，同时还可以使凝胶的温度升高(到 50℃左右)，有利于RNA电泳时维持在变性状态。预电泳电流见下面第 5 条。
2. 将miRNA样品与等体积的miRNAload 混合，70℃保温 2-3分钟后迅速放置在冰上冷却，快速离心半分钟，放冰上待用。
3. 关电泳仪后开始上样。注意：每次上样后如果不更换枪头，则需要充分吹打洗净枪头以防样品的交叉污染。
4. 同时上样 miRNA Marker。
5. 重开电泳仪，对 13cm×15 cm的胶，以20-30mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止；对 36cm×45cm的胶，则以50-60mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止。

四、后续处理
1.染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每100mL 1×TBE中加 20μL 10mg/mL的EB溶液)、我们公司低毒核酸染料 DNAgreen(每100mL 1×TBE中加10μL DNAgreen 原液)。UV下观察并拍照。
2. miRNA回收：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
3. Northern杂交：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
4. 放射自显影：如果miRNA样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟X光片向对置进行放射自显影。