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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
2年
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
5ug
基本信息
| 启动子: | mU6 |
|---|---|
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan |
| 筛选标记: | 遗传霉素G418 |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | 37℃ |
质粒简介
pmU6-gRNA是一个哺乳细胞gRNA表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3542 bp ds-DNA circular SYN 20-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3542
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 670..984
/label=mU6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for mouse U6 snRNA (Das
et al., 1988)"
misc_RNA 1001..1076
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
rep_origin complement(1562..2150)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2227..3021)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(3056..3413)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3070..3205
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter complement(3415..3519)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg
481 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg
541 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg
601 taaaacgacg gccagtgagc gcgcgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtacccg
661 tctcagatag atccgacgcc gccatctcta ggcccgcgcc ggccccctcg cacagacttg
721 tgggagaagc tcggctactc ccctgccccg gttaatttgc atataatatt tcctagtaac
781 tatagaggct taatgtgcga taaaagacag ataatctgtt ctttttaata ctagctacat
841 tttacatgat aggcttggat ttctataaga gatacaaata ctaaattatt attttaaaaa
901 acagcacaaa aggaaactca ccctaactgt aaagtaattg tgtgttttga gactataaat
961 atcccttgga gaaaagcctt gtttgtcttc gagaagacct gttttagagc tagaaatagc
1021 aagttaaaat aaggctagtc cgttatcaac ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgctttt
1081 tttgtactga gacgccgcgg tggagctcca gcttttgttc cctttagtga gggttaattg
1141 cgcgcttggc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg aaattgttat ccgctcacaa
1201 ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc ctggggtgcc taatgagtga
1261 gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt
1321 gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct
1381 cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat
1441 cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga
1501 acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt
1561 ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt
1621 ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc
1681 gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa
1741 gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct
1801 ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta
1861 actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg
1921 gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc
1981 ctaactacgg ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta
2041 ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg
2101 gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt
2161 tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg
2221 tcatgatcag aagaactcgt caagaaggcg atagaaggcg atgcgctgcg aatcgggagc
2281 ggcgataccg taaagcacga ggaagcggtc agcccattcg ccgccaagct cttcagcaat
2341 atcacgggta gccaacgcta tgtcctgata gcggtccgcc acacccagcc ggccacagtc
2401 gatgaatcca gaaaagcggc cattttccac catgatattc ggcaagcagg catcgccatg
2461 ggtcacgacg agatcctcgc cgtcgggcat gctcgccttg agcctggcga acagttcggc
2521 tggcgcgagc ccctgatgct cttcgtccag atcatcctga tcgacaagac cggcttccat
2581 ccgagtacgt gctcgctcga tgcgatgttt cgcttggtgg tcgaatgggc aggtagccgg
2641 atcaagcgta tgcagccgcc gcattgcatc agccatgatg gatactttct cggcaggagc
2701 aaggtgagat gacaggagat cctgccccgg cacttcgccc aatagcagcc agtcccttcc
2761 cgcttcagtg acaacgtcga gcacagctgc gcaaggaacg cccgtcgtgg ccagccacga
2821 tagccgcgct gcctcgtctt gcagttcatt cagggcaccg gacaggtcgg tcttgacaaa
2881 aagaaccggg cgcccctgcg ctgacagccg gaacacggcg gcatcagagc agccgattgt
2941 ctgttgtgcc cagtcatagc cgaatagcct ctccacccaa gcggccggag aacctgcgtg
3001 caatccatct tgttcaatca tgcgaaacga tcctcatcct gtctcttgat cgatctttgc
3061 aaaagcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca gaggccgagg
3121 cggcctcggc ctctgcataa ataaaaaaaa ttagtcagcc atggggcgga gaatgggcgg
3181 aactgggcgg agttaggggc gggatgggcg gagttagggg cgggactatg gttgctgact
3241 aattgagatg catgctttgc atacttctgc ctgctgggga gcctggggac tttccacacc
3301 tggttgctga ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gcctgctggg gagcctgggg
3361 actttccaca ccctaactga cacacattcc acagctggtt ctttccgcct caggactctt
3421 cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt
3481 tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc
3541 ac
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文献和实验Cell Rep:上海科技大学季泉江团队开发出高效微型 CRISPR-SpaCas12f1 基因编辑系统
。同时,研究人员发现 SpaCas12f1 的 tracrRNA 具有独特的 head-to-toe 的发夹结构,这是限制 SpaCas12f1 在哺乳动物细胞有效编辑的主要因素。通过对 RNA 二级结构预测及小 RNA 测序结果分析,研究人员设计了五种策略,系统地工程化向导 RNA,成功地获得了高效的引导 RNA,gRNA_MS13,从而实现 CRISPR-SpaCas12f1 高效哺乳动物细胞编辑。 这项研究扩展了微型 CRISPR 核酸酶工具库,并为基因治疗和工程化微型 CRISPR 系统提供
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室,CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复,其实际上就是一种基因编辑器,是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来,研究人员发现,它似乎是一种精确的万能基因武器,可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步:1. 确定待敲除基因的靶位点;2. 设计识别靶位点识别的一对
Nature 子刊:迈出基因组重编码制备抗病毒人类细胞系的第一步
,初步证明了 TAG 转换为 TAA 在人类基因组中的可行性,同时创造了一次递送在人类基因组中数十个非重复位点同步碱基编辑的记录,为哺乳动物基因组的大规模工程化改造提供了一个工作框架。此外, GRIT 软件也可以被开发成一个新的计算机辅助设计 (CAD) 平台,用于设计编写大规模的基因组。 该研究迈出了基因组重编码制备抗多种天然病毒人类细胞系的第一步,为哺乳动物基因组多重复合编辑和 GP-write 路线图的制定奠定了基础。 虽然读取 DNA 密码的技术不断进步,但科学家们编写 DNA 密码
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