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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
2年
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
2UG/5UG
| 规格: | 2UG | 产品价格: | ¥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5UG | 产品价格: | ¥1500.0 |
基本信息
| 别名: | NM_013268.2 ,GAL13, PLAC8, PP13 |
|---|---|
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | 37℃ |
质粒简介
pT7-His-LGALS13是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5701 bp ds-DNA circular SYN 28-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5701
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
RBS 199..221
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
misc_feature 276..695
/note="LGALS13"
terminator 786..833
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 870..1325
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(1418..2233)
/codon_start=1
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 2355..2943
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 3129..3271
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(3373..3564)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(4373..5455)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(5456..5533)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatgtc ttctttaccc gtgccataca
301 aactgcctgt gtctttgtct gttggttcct gcgtgataat caaagggaca ccaatccact
361 cttttatcaa tgacccacag ctgcaggtgg atttctacac tgacatggat gaggattcag
421 atattgcctt ccgtttccga gtgcactttg gcaatcatgt ggtcatgaac aggcgtgagt
481 ttgggatatg gatgttggag gagacaacag actacgtgcc ctttgaggat ggcaaacaat
541 ttgagctgtg catctacgta cattacaatg agtatgagat aaaggtcaat ggcatacgca
601 tttacggctt tgtccatcga atcccgccat catttgtgaa gatggtgcaa gtgtcgagag
661 atatctccct gacctcagtg tgtgtctgca attgactcga gcaccaccac caccaccact
721 gagatccggc tgctaacaaa gcccgaaagg aagctgagtt ggctgctgcc accgctgagc
781 aataactagc ataacccctt ggggcctcta aacgggtctt gaggggtttt ttgctgaaag
841 gaggaactat atccggattg gcgaatggga cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc
901 gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc
961 tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa
1021 tcgggggctc cctttagggt tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact
1081 tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt
1141 gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa
1201 ccctatctcg gtctattctt ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt
1261 aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaatttt aacaaaatat taacgtttac
1321 aatttcaggt ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta
1381 aatacattca aatatgtatc cgctcatgaa ttaattctta gaaaaactca tcgagcatca
1441 aatgaaactg caatttattc atatcaggat tatcaatacc atatttttga aaaagccgtt
1501 tctgtaatga aggagaaaac tcaccgaggc agttccatag gatggcaaga tcctggtatc
1561 ggtctgcgat tccgactcgt ccaacatcaa tacaacctat taatttcccc tcgtcaaaaa
1621 taaggttatc aagtgagaaa tcaccatgag tgacgactga atccggtgag aatggcaaaa
1681 gtttatgcat ttctttccag acttgttcaa caggccagcc attacgctcg tcatcaaaat
1741 cactcgcatc aaccaaaccg ttattcattc gtgattgcgc ctgagcgaga cgaaatacgc
1801 gatcgctgtt aaaaggacaa ttacaaacag gaatcgaatg caaccggcgc aggaacactg
1861 ccagcgcatc aacaatattt tcacctgaat caggatattc ttctaatacc tggaatgctg
1921 ttttcccggg gatcgcagtg gtgagtaacc atgcatcatc aggagtacgg ataaaatgct
1981 tgatggtcgg aagaggcata aattccgtca gccagtttag tctgaccatc tcatctgtaa
2041 catcattggc aacgctacct ttgccatgtt tcagaaacaa ctctggcgca tcgggcttcc
2101 catacaatcg atagattgtc gcacctgatt gcccgacatt atcgcgagcc catttatacc
2161 catataaatc agcatccatg ttggaattta atcgcggcct agagcaagac gtttcccgtt
2221 gaatatggct cataacaccc cttgtattac tgtttatgta agcagacagt tttattgttc
2281 atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag
2341 atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa
2401 aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg
2461 aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag
2521 ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg
2581 ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga
2641 tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc
2701 ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc
2761 acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga
2821 gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt
2881 cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg
2941 aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac
3001 atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga
3061 gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg
3121 gaagagcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata
3181 tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag tatacactcc
3241 gctatcgcta cgtgactggg tcatggctgc gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc
3301 gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg
3361 gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgaggc agctgcggta
3421 aagctcatca gcgtggtcgt gaagcgattc acagatgtct gcctgttcat ccgcgtccag
3481 ctcgttgagt ttctccagaa gcgttaatgt ctggcttctg ataaagcggg ccatgttaag
3541 ggcggttttt tcctgtttgg tcactgatgc ctccgtgtaa gggggatttc tgttcatggg
3601 ggtaatgata ccgatgaaac gagagaggat gctcacgata cgggttactg atgatgaaca
3661 tgcccggtta ctggaacgtt gtgagggtaa acaactggcg gtatggatgc ggcgggacca
3721 gagaaaaatc actcagggtc aatgccagcg cttcgttaat acagatgtag gtgttccaca
3781 gggtagccag cagcatcctg cgatgcagat ccggaacata atggtgcagg gcgctgactt
3841 ccgcgtttcc agactttacg aaacacggaa accgaagacc attcatgttg ttgctcaggt
3901 cgcagacgtt ttgcagcagc agtcgcttca cgttcgctcg cgtatcggtg attcattctg
3961 ctaaccagta aggcaacccc gccagcctag ccgggtcctc aacgacagga gcacgatcat
4021 gcgcacccgt ggggccgcca tgccggcgat aatggcctgc ttctcgccga aacgtttggt
4081 ggcgggacca gtgacgaagg cttgagcgag ggcgtgcaag attccgaata ccgcaagcga
4141 caggccgatc atcgtcgcgc tccagcgaaa gcggtcctcg ccgaaaatga cccagagcgc
4201 tgccggcacc tgtcctacga gttgcatgat aaagaagaca gtcataagtg cggcgacgat
4261 agtcatgccc cgcgcccacc ggaaggagct gactgggttg aaggctctca agggcatcgg
4321 tcgagatccc ggtgcctaat gagtgagcta acttacatta attgcgttgc gctcactgcc
4381 cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg
4441 gagaggcggt ttgcgtattg ggcgccaggg tggtttttct tttcaccagt gagacgggca
4501 acagctgatt gcccttcacc gcctggccct gagagagttg cagcaagcgg tccacgctgg
4561 tttgccccag caggcgaaaa tcctgtttga tggtggttaa cggcgggata taacatgagc
4621 tgtcttcggt atcgtcgtat cccactaccg agatatccgc accaacgcgc agcccggact
4681 cggtaatggc gcgcattgcg cccagcgcca tctgatcgtt ggcaaccagc atcgcagtgg
4741 gaacgatgcc ctcattcagc atttgcatgg tttgttgaaa accggacatg gcactccagt
4801 cgccttcccg ttccgctatc ggctgaattt gattgcgagt gagatattta tgccagccag
4861 ccagacgcag acgcgccgag acagaactta atgggcccgc taacagcgcg atttgctggt
4921 gacccaatgc gaccagatgc tccacgccca gtcgcgtacc gtcttcatgg gagaaaataa
4981 tactgttgat gggtgtctgg tcagagacat caagaaataa cgccggaaca ttagtgcagg
5041 cagcttccac agcaatggca tcctggtcat ccagcggata gttaatgatc agcccactga
5101 cgcgttgcgc gagaagattg tgcaccgccg ctttacaggc ttcgacgccg cttcgttcta
5161 ccatcgacac caccacgctg gcacccagtt gatcggcgcg agatttaatc gccgcgacaa
5221 tttgcgacgg cgcgtgcagg gccagactgg aggtggcaac gccaatcagc aacgactgtt
5281 tgcccgccag ttgttgtgcc acgcggttgg gaatgtaatt cagctccgcc atcgccgctt
5341 ccactttttc ccgcgttttc gcagaaacgt ggctggcctg gttcaccacg cgggaaacgg
5401 tctgataaga gacaccggca tactctgcga catcgtataa cgttactggt ttcacattca
5461 ccaccctgaa ttgactctct tccgggcgct atcatgccat accgcgaaag gttttgcgcc
5521 attcgatggt gtccgggatc tcgacgctct cccttatgcg actcctgcat taggaagcag
5581 cccagtagta ggttgaggcc gttgagcacc gccgccgcaa ggaatggtgc atgcaaggag
5641 atggcgccca acagtccccc ggccacgggg cctgccacca tacccacgcc gaaacaagcg
5701 c
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文献和实验shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒,现在找到一个名为pBOR8的质粒,只有质粒简图,没找到全序列,质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq,如下图: 现有两个问题想请教各位高人 (1)该质粒能否直接作为表达载体,将外源基因克隆到该质粒上,如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点? (2)如果不能直接进行外源基因克隆和表达,那么应该
分,一是未稳定整合的,一是稳定整合的,所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光:首先,经过G418筛选,外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡;其次,稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应,即整合于不利于外源基因表达的位置,从而使外源基因沉默;第三,我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列,如果有的话,研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同,可以查查相关文献 3.有无好的办法:我认为没有,稳定转染筛选时有运气的成分,假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位,这时筛
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
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