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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
2年
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
2UG/5UG
| 规格: | 2UG | 产品价格: | ¥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5UG | 产品价格: | ¥1500.0 |
基本信息
| 别名: | BC031647.1;CAMKKA;DKFZp761M0423;MGC3 |
|---|---|
| 原核抗性: | 氨苄青霉素Amp |
| 筛选标记: | 无 |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | LB/37℃ |
质粒图谱
pCMV-SPORT6-CAMKK1人源基因模板质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pCMV-SPORT6-CAMKK1人源基因模板质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验质粒转染细胞的效率受到多种因素的影响,如细胞的类型,细胞的状态,转染时细胞的密度,转染的方式(电转或化转),DNA 的质量、转染试剂的选择等。从质粒角度来看,超螺旋比例高,且内毒素残留低的质粒会更有利于提高细胞转染的效率。 pCMVβ DNA 用不同试剂盒提取,转染 Huh-7 细胞,转染效率对比 5. 质粒酶切有问题,切不开或者酶切有杂带 酶切切不开可能跟酶本身状态、酶切缓冲液、酶切温度以及质粒本身都有关系。从酶切条件考虑,在确保酶活性的前提下,选择合适的酶切缓冲液、温度
浓度不同,两种引物浓度相差 100 倍。在最初 20 各循环中,主要产物是双链 DNA。当低浓度引物被耗尽后,高浓度引物引导的 PCR 就会产生大量单链 DNA,单链 DNA 可用于序列测定。 三、主要试剂 1. DNA 模板(1ng/μL)(质粒 R-pGEX-4T-1,R 指代外源基因) 2. 2.5mmol/LdNTP (TaKaRa) 3. 10×PCR 缓冲液(TaKaRa) 4. 25mmol/L MgCl 2 (TaKaRa) 5. 引物 1、引物 2(5pmol/μL) 引物
对照的siRNA应该和选中的siRNA序列有相同的组成,但是和mRNA没有明显的同源性.通常的做法是将选中的siRNA中的碱基序列打乱.当然,同样要保证它和其他基因没有同源性.3、RNAi表达载体的选用化学合成与体外转录方法都是在体外得到siRNA后再导入细胞内,但是这两种方法主要有两方面无法克服的缺点:siRNA进入细胞后容易被降解;进入细胞siRNA在细胞内的 RNAi效应持续时间短.针对这种情况,出现了质粒、病毒类载体介导的siRNA体内表达.该方法的基本思路是:将siRNA对应的DNA双链模板
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