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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
43
- 英文名：
人 NK 细胞分离液 1.062
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
200mL
1）人 NK 细胞分离液 1.062200mL费用客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
以下是人 NK 细胞分离液 1.062200mL费用的详细介绍点击了解更多蛋白质研究产品：
储存事项:
A. 人 NK 细胞分离液 1.062200mL费用在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. 人 NK 细胞分离液 1.062200mL费用组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
实验步骤：
(1) 人 NK 细胞分离液 1.062200mL费用实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验的 Percoll,如用10ml试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2～1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×10８悬于１ml培 基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL细胞位于42.5％与45％Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。 2. 纯化淋巴母细胞和除去死细胞：分别叠加50％和30％Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异 型的PBMC(如肾综合征出血热患者)，按要求装样
试剂 1. 小牛血清 2. Percoll细胞分离液 3. 8.5％NaCl 4. 1.5MPBS 实验设备 1. 高速冷冻离心机(3K-30) 2. 4℃、-20℃冰箱 3. 长针头注射器 4. 1.5mL和10mL离心管 实验材料 PBMC细胞 实验步骤 1. 不同
从外周血分离单个核细胞，以粘附法除去其中的单核细胞后，以尼龙棉柱法除去其中的B细胞，余下的T细胞和NK细胞以磁化细胞分离器(MACS)进行分离。有两种方法：阴性选择法，在反应中加入抗CD3抗体，使T细胞与之特异结合后形式磁性分离柱内，以除去标记的T细胞，洗下的未标记细胞；阳性选择法，在反应中加入抗CD16及抗CD56，使NK细胞与之特异结合形成磁性免疫复合物留于柱内，将未标记细胞洗去后，将标记的NK细胞以洗液轻轻加压洗脱。 试剂及配制 1. 含10%血清PRMI-1640液
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