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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
370
- 英文名:
DNA Marker(100bp~600bp)
- 保质期:
三个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃可保存一年以上,4℃
- 规格:
50次(300μ)|200次(4×300μl)
特别提示:包括DNA Ladder(100~600bp)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:DNA Ladder(100~600bp)
英文名称:DNA Marker(100bp~600bp)
产品货号:WH0148
产品规格:50次(300μ)|200次(4×300μl)
本制品是由6条线状双链DNA条带组成,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。本制品为即用型产品,已含有1×Loading Buffer,可根据实验需要,直接取3-6μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。
本产品中6条带分别为600、500、400、300、200、100 bp,若上样量为6μl,则400 bp带约为100ng,其余带约为50ng。
条带图:6μl加样,凝胶长度10cm,电压6V/cm,0.5×TBE Buffer
贮存液组成:10mM Tris-HCl(pH8.4),10mM EDTA,0.02%溴酚兰,5%甘油
储存条件:-20℃可保存一年以上,4℃保存三个月。
使用方法:
1.取3-6μl本产品加入琼脂糖凝胶的加样孔中进行电泳(每1mm点样孔宽度加1 μl,如果加样孔较宽,可适当增加上样量)。
2.建议电泳条件为1.5-2.5%琼脂糖凝胶,正负极之间电压4-10 v/cm。
3.通过EB染色,在紫外灯下观察电泳条带
注意事项:
1.本产品可直接使用,不要加热。
2.及时更换电泳缓冲液并使用新制的凝胶,以免影响电泳结果。
除了DNA Ladder(100~600bp),,我公司还供应以下相关产品:
名称:SYBR Green Ⅱ核酸染料(10000×)
货号:BTN140234
规格:100μL
SYBR Green II染料是一种高敏感的核酸染色试剂,可以对RNA或者是单链的DNA进行染色。不传统的EB等染料相比,SYBR Green II染料具有灵敏度更高,低毒安全,可用于杂交前RNA质量的检测而不影响的转膜等显著优点。
产品特点:
1. 灵敏度高,信噪比高,样品荧光信号强,背景信号低。可检测出100pg RNA或者单链DNA。不EB相比,SRBR Green II -RNA 复合物所激发的荧光是EB-RNA 复合物激发荧光的7倍。在变性琼脂糖/尿素胶等条件下,SYBR Green II的灵敏度但仍高于EB,使用300nm 透射光显影,非变性凝胶中检测核酸的灵敏度可以达到5×10-7克。
2. 操作简单,无须脱色或冲洗。使用方便,丌影响其它修饰酶作用。完全可以代替银染,同时还兊服了银染实验过程复杂、操作繁琐、费时的缺点。
3. SYBR Green II 丌是特异性的结合RNA或者DNA 单链,其对单链的结合效率是双链的约2倍。不其他大部分核酸染料丌同,SYBR Green II 不RNA 结合的荧光量子产率和荧光范围高于不DNA 结合。
4.荧光范围广,可使用多种成像设备观测。zuì大激发波长在497nm处,次激发波长在245nm 附近。发射波长在520nm处产生。
5.适用范围广,可适用于多种电泳分析、DGGE和SSCP 及RNA 质量分析实验。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
SYBR Green II染料检测核酸时即可用于预染也可电泳后染色。
1.预染实验
取1μL 贮存液加入1ml TE缓冲液或者灭菌双蒸水中混匀,再加入1ml的6×loading buffer上样缓冲液混匀(此时溶液为1:2000 稀释,即为工作液)电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后直接上样。
2.电泳后染色
a.电泳后,在室温、避光的情况之下准备染色液。染色液要在塑料器皿中制备而丌要在玻璃器皿中,因为玻璃表层对该试剂有吸附作用。
b.染料取出后室温放置,恢复室温后简单离心混匀。
c.染色液使用1×TBE缓冲液进行1:10,000 稀释。如果是琼脂糖jiǎ醛变性胶,用1×TBE做1:5000的稀释。由于SYBR Green II RNA染色液灵敏度高,所以要选用新鲜的1×TBE缓冲液进行稀释,以克缓冲液中残存的杂质产生背景,影响实验结果。注意:为提高染色的灵敏度,需要保证缓冲液的PH 值7.5-8 之间。
d. 把胶放在塑料的染色容器中,加入足够染色液使之覆盖整块胶。用铝箔遮盖或者是放在暗处避光。在染色之前没有必要先将胶中的变性剂如尿素和jiǎ醛洗出来,因为本产品复合物发出的荧光在jiǎ醛或者尿素存在时丌会猝灭。
e.在室温下轻轻摇晃凝胶。聚丙*酰胺凝胶的zuì佳染色时间是10-40分钟,琼脂糖凝胶的zuì佳染色时间是20-40分钟。染色时间也可能随着凝胶的厚度和浓度变化。由于其荧光本底很低,凝胶染色后无需脱色。染色工作放在2-8℃ 避光保存,可以重复使用3-4次。
注意:SYBR Green II RNA染色液丌影响RNA 向膜上的转移和northern中的后续实验。
3.染色胶显色和成像
本产品所激发的荧光可以使用300nm和254nm光波照射,通过Wratten 15滤光片检测。注意:由于荧光本底较低,所以可以通过适当延长曝光时间的方法检测痕量的核酸。
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文献和实验;还有一个原因是你设置的电压太高,最好是2~4v/cm,跑4~6小时比较合适(2)“我是按说明书上0。8%的琼脂糖”:凝胶浓度太低了,把凝胶浓度加大到2%,放心做,没问题的(3)“说明书上说混合温和”:那是怕你混匀太剧烈导致细胞基因组DNA断裂啊,注意很轻轻的混匀(4)“收集凋亡细胞时离心时转速”:我在实验室中是5000rpm,离心5min,我觉得足已mmyycc :我的ladder总是只有一条带,与对照组差别不大,用的是100v,1-1.5h,不知道是不是这个原因?溴酚兰跑到什么位置合适
绝版分子生物学实用技术分享: I: 20 种用于各种DNA marker 制备的PLASMID: P1: 2k+1.5k+1k+800+700+600+500+400+300+200X2+100X4 (100BP ladder) P2: 3k+1.5k+1k+900+700+500+300X2 (200BP ladder 奇数) P3: 3k+2k+1.4k+1k+800+600+4X2 (200BP ladder 偶数) (P3\P4\P5 组合, 可拓展为1KB ladder
试剂盒(玻璃乳法):(1)在 UV 灯下,从琼脂糖凝胶上切下含 DNA 片段的凝胶,放入一离心管中;(2)加入 3 倍体积的 6 mol/L NaI 溶液,45~55 ℃ 水浴 5~10 min 使胶完全融化;(3)加入 10? 滋 l 玻璃乳悬液,轻弹管底混匀,然后 45~55 ℃ 水浴 5~10 min,期间每 2~3 min 混匀一次;(4)5000 rpm 离心 30~60 秒,弃上清;(5) 加 400? 滋 l 漂洗液(20 mM Tris.Cl,pH7.4/1 mM EDTA/100 mM
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