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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
56
- 英文名：
Y2HGold 酵母化学感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10×100μL
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
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操作步骤:
1. Y2HGold 酵母化学感受态细胞10×100μL品牌匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
以下是Y2HGold 酵母化学感受态细胞10×100μL品牌的相关产品：
RNase-free PVP K30 溶液 ,20%100mL 植物种属鉴定 PCR Mix 3100 次
RNase-free Sarkosyl 溶液 ,10%100mL 植物种属鉴定 PCR Mix 2100 次
RNase-free SDS 溶液 ,10%100mL 植物种属鉴定 PCR Mix 11100 次
RNase-free 乙酸 ,3M,pH 5.2100mL 植物种属鉴定 PCR Mix 1100 次
RNase-free Tris HCl,1M,pH 6.5100mL 植物种
DNA 电泳分子量标准 (3)λ/EcoR I+ Hind III50 次 气相 RNase 清除剂120mL
DNA 电泳分子量标准 (3)pBR322/BstN I50 次 葡萄球菌 RNAout50 次
DNA 电泳分子量标准 (3)φX174 DNA/Hae Ⅲ50 次 平滑肌细胞生长因子5mL
DNA 电泳分子量标准 (3)φX174 DNA/Hinc Ⅱ50 次 平滑肌细胞生长因子 ( 不含血清 )5mL
Southern 专用 DNA Marker( 生物素 )20 次 嘌呤霉素干
亲和层析柱50 mL RNase-free DTT 溶液 ,1M10mL
镍柱介质2mL RNase-free 75% 乙醇250mL
镍柱介质10mL RNase 抑制剂 ( 猪源 )500U
钴柱介质10mL RNase 抑制剂 ( 小鼠源 )3000U
天净沙镍柱原位再生试剂盒20 次 RNase 抑制剂 ( 人源 )400U
表皮葡萄球菌冻干粉 阴沟肠杆菌阴沟亚种
掘氏疫霉 地霉属
苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae 葡萄芽假丝酵母
阿达青霉 抗生链霉菌 Streptomyces antibioticus
长根菇（长根奥德磨） 长孢洛德酵母 Lodderomyces elongisporus
发根土壤杆菌（发根植物单胞菌） 红曲霉菌
苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种Bacillusthuringiensissubsp.galleriae 里氏木霉
杏鲍菇 木耳
迟缓爱德华氏菌 表面培养基60mm/25cm2
阴沟肠杆菌 苍白芽孢杆菌
Y2HGold 酵母化学感受态细胞10×100μL品牌红平红球菌 塔宾曲霉
枯草芽孢杆菌黑色变种AS1.433冻干粉南京便诊 粘质沙雷氏菌
多粘芽孢杆菌 圆酵毛壳
鲁氏接合酵母 海洋盐单胞菌
乙型副伤寒沙门菌冻干粉 胰蛋白胨大豆琼脂表面培养基60mm/25cm2
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Electron Microscopy and In Situ Hybridization: Expression of P2Y2 Receptor mRNA in the Cerebellum
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情况下用大约 20～30 单位的酶大约 3 小时可以酶切完全。酶切后我们建议用琼脂糖凝胶回收线性化载体。将回收后的线性化载体定量，通常线性化载体的工作浓度为 50～100ng/μl。连接用水将退火后双链寡核苷酸 (10 μM) 稀释 100 倍备用。连接反应体系：T4 DNA 连接酶 5UEcoRV 5U线性化载体 2 μl稀释 100 倍后双链寡核苷酸 1 μl10× 连接酶 Buffer 1 μl50% PEG4000 1 μl加水补足 10 μl反应条件： 22℃ 30 min， 37℃ 15
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
