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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
45
- 英文名：
Stbl3 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1 mL×10
服务流程：
1）Stbl3 感受态细胞0.1 mL×10规格客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
储存事项:
A. Stbl3 感受态细胞0.1 mL×10规格在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. Stbl3 感受态细胞0.1 mL×10规格组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
PCR 法 DNA 探针生物素标记试剂盒 5次 考马斯亮蓝 G-250 染液250mL
TdT 加尾法 DNA 标记试剂盒5次 抗凝血酶Ⅲ，10mg/mL1mL
TdT 加尾法 DNA 生物素标记试剂盒5次 菌体内毒素清除剂200mL
填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次 菌落 PCR 试剂盒 2.050 次
填入法 DNA 末端标记试剂盒 B5次 聚乙二醇100g
无包被磁珠2mL 酸酚100mL
第三章 “归去来”核酸电泳及回收产品 丝状真菌线粒体 DNAout15 次
一站式 RNA 电泳套装10 次 C 溶液 ,5mg/mL10mL
一站式 DNA 尿素 -PAGE 电泳套装30 次 水蛭素溶液，2mg/mL0.1mL
一站式 miRNA 尿素 -PAGE 电泳套装30 次 水样病毒沉淀剂10 次
糖蛋白染色试剂盒10 次 Rapamycin(FRAP/mTOR 抑制剂 )100μg
磷酸蛋白染色试剂盒10 次 Quin-2AM1mg
组氨酸标签蛋白染色试剂盒10 次 PMSF 溶液，10mg/mL5mL
Bradford 法蛋白定量试剂盒100mL PMA/TPA (PKC 激活剂 )1mg
Bradford 法蛋白定量试剂盒200mL Pifithrin-a(p53 抑制剂 )5mg
贝雷丝孢酵母 三七根腐病菌 Fusarium solani
平展米曲霉（米曲霉平展变种） 弗氏链霉菌
无壳曲霉 黑球漆斑菌
过渡原囊菌 鹿皮色曲霉
改良马丁琼脂培养基200ml 浮游球衣菌
多头霉 营养肉汤培养基7ml
玫烟色拟青霉 黑曲霉
苏云金芽胞杆菌库尔斯塔克亚种Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki 苏云金芽胞杆菌鲇泽变种 Bacillus thuringienis var. aisawai
山梨醇发酵管5ml 30 支/盒 黄柄曲霉
大球盖菇 吸水链霉菌紫色变种
Stbl3 感受态细胞0.1 mL×10规格黑曲霉菌CMCC98003冻干粉 环状芽孢杆菌
斯氏油脂酵母 保加利亚乳杆菌
沙门氏菌IV 黄色长孢链霉菌
长毛壳 香茅醇假单胞菌
金黄色葡萄球菌冻干粉 黑曲霉菌CMCC98003冻干粉南京便诊
实验步骤：
(1) Stbl3 感受态细胞0.1 mL×10规格实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验) Media LB or SOB medium for initial growth of culture LB (Luria-Bertani) Medium Per Liter: To 950 ml of deionized H2 O , add: Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g
5mlLB培养基中，于37℃培养3－5小时 3.将培养液全部转到100mlLB培养基中培养2－3小时，到OD600＝0.3－0.4感受态细胞制备: 4.将培养液转入1.5ml离心管中，在冰上放置15－30min 5.4000rpm离心5min,弃上清 6.加入0.8ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，冰上预冷10min 7.4000rpm离心5 min,弃上清 8.加入0.2ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，即可使用。也可加入总体积15％的甘油 可－70℃长期
min离心10min（从这一步开始，所有操作均在冰上进行，速度尽量快而稳）；(3) 倒净上清培养液，用1ml冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，冰浴；(4) 0～4℃，4000r／min离心10min；(5) 弃去上清液，加入500µll冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心悬浮细胞。0～4℃，4000r／min离心10min；(6) 弃去上清液，加入100µl冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心悬浮细胞，冰上放置片刻后，即制成了感受态细胞悬液；(7) 制备好的感受态细胞
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