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- 上海邦景
- BJ-RD753
- 进口、国产
- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Tuner(DE3)plysS 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1mL×10
服务流程：
1）Tuner(DE3)plysS 感受态细胞0.1mL×10规格客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
储存事项:
A. Tuner(DE3)plysS 感受态细胞0.1mL×10规格在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. Tuner(DE3)plysS 感受态细胞0.1mL×10规格组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
lambda(λ)DNA5μg 超快蛋白银染试剂盒1000mL
lambda(λ)DNA5μg 超级杂交液 B（含甲酰胺）100mL
lambda(λ)DNA5μg 超级杂交液 A（不含甲酰胺）100mL
φX174RF Ⅰ DNA30μg 超级杂交液 (Oligo 探针 )10mL
φX174RF Ⅱ DNA30μg 超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL
柱式酵母质粒 DNAout50 次 细菌 DNAout250 次
柱式 BAC DNAout 50 次 细胞松弛素 B 溶液 ,20mg/mL0.1mL
中提柱式 BAC DNAout5次 细胞核蛋白提取试剂盒50 次
柱式 Ti 质粒 DNAout 50 次 细胞表面蛋白分离试剂盒8次
大提柱式 Ti 质粒 DNAout5次 无脊椎动物种属鉴定 PCR Mix100 次
微量 RNA 定量试剂盒1mL 鲑鱼精 DNA 溶液1mL
第五章 核酸扩增产品 硅胶膜离心吸附柱再生液500 次
PCR 优化试剂盒1套 硅胶膜离心吸附柱系列 ( 小提 )50 套
MgCl2溶液，25mM，PCR 级5mL 硅胶膜离心吸附柱 ( 小提 ) 收集管50 只
明胶溶液，2%，PCR 级1.5mL 硅胶膜离心吸附柱 ( 大提 ) 收集管1只
孢囊杆菌 表皮葡萄球菌ATCC12228冻干粉
栗酒裂殖酵母 雅致枝霉
绿色木霉=木素木霉 红法夫酵母
烟曲霉 Slackiaequolifaciens 模式菌株
毛木耳(紫木耳、黄背木耳) 长赤细菌 模式菌株，产生细菌叶绿素
冬虫夏草 乳酸链球菌 Lactococcus lactis
硫乙醇酸盐平板培养基70mm 苏云金芽胞杆菌苏云金变种 Bacillus thuringeinsis subsp. thuringeinsis
丁香假单胞菌 白浅灰链霉菌
侵蚀侏儒囊菌 丝球毛霉
皮状丝孢酵母 炭黑曲霉
Tuner(DE3)plysS 感受态细胞0.1mL×10规格汉逊德巴利酵母 大肠埃希氏菌(大肠杆菌) 肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)。药敏结果：对磺胺异噁唑、甲氧苄啶、啶酸和阿莫西林耐药；对链霉素、霉素、苄霉素、四环素、头孢噻肟、左氧沙星、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、头孢曲松、氧沙星及环丙沙星不耐药。侵袭性质粒（ipaH）。致腹泻
金黄色葡萄球菌冻干粉 创伤弧菌 模式菌株
短波单胞菌 嗜酸乳杆菌 发酵乳制品
苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae pH7.0-蛋白胨缓冲液10
实验步骤：
(1) Tuner(DE3)plysS 感受态细胞0.1mL×10规格实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验（ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner
本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
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